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人转铁蛋白(TF)试剂he

如果您对该感xing趣的话,ke以
名称: 人转铁蛋白(TF)试剂he
型号: TF
zhan商: ELISA试剂he
文档: wuxiang关文档

简单介shao

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人转铁蛋白(TF)试剂he  的详xi介shao


转铁蛋白(TF)试剂he

使用说明书

转铁蛋白(TF)试剂he基本原理:

本试剂he采用shuang夹心ELISA法。用kang人TFbaobei于酶biao板上,实yan时样品或biao准品中的人TF与baobei结合,游离的成分bei洗去。依次jia入生物素化的kang人TF和lagen过氧化物酶biao记的qin和素。kang人TF与结簒ian赽aobei上的人TF结合、生物素与qin和素特异性结合而形成**复合物,游离的成分bei洗去。jia入xianse底物(TMB),TMB在lagen过氧化物酶的催化下呈xian蓝se,jia终止液后变成黄se。用酶biao仪在450nm波长处测OD值,人TF浓度与OD450值之间硈hou齜i,通过绘制biao准quxian计算出样品中人TF的浓度

转铁蛋白(TF)试剂he描shu:

ying文名称 Human TF (Transferrin) ELISA Kit
中文名称 人转铁蛋白(TF)酶lian**吸附测定试剂he
货号 X-EL-H0171c 种属 Human/人
规ge 96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)
检测方法 shuang夹心法
检测范wei 1.563~100ng/mL 灵min度 0.938ng/mL

试剂he组成:

中文名称

ying文名称

规ge

保存

  ELISA酶biao板(ke拆卸)

  Micro ELISA  Plate(Dismountable)

  8×12 / 8×6*

4/-20 #

冻干biao准品

Reference Standard

  2/1 *

4/-20 #

biao准品&样品稀释液

Reference Standard & Sample Diluent

  1 20mL/12mL*

4

浓缩生物素化

Concentrated Biotinylated Detection Ab

  1 120μL/70μL*

4/-20 #

生物素化稀释液

Biotinytated Detection Ab Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩HRP酶结合物

Concentrated HRP Conjugate

  1 120μL/70μL*

4(避光)

酶结合物稀释液

HRP Conjugate Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩洗涤襤ai?/span>25×

ConcentratedWashBuffer (25×)

  1 30mL/16mL*

4

底物溶襤ai?/span>TMB

Substrate Reagent

  1 10mL/6mL*

4(避光)

穋ongχ罩挂裹/span>

Stop Solution

  1 10mL/6mL*

4

封板覆膜

Plate Sealer

  5/3 *

 

说明书

Product  Description

  1 

 

质检报告

Certificate of Analysis

  1 

 

特别说明
*: [96T/48T](打开bao装后请及时检查suo有物品是否齐全完zheng)
#: yizhouna使觤ei纱嬗冱/span>4℃,需长时间存放或多次使用建yi存于-20.                                      

转铁蛋白(TF)试剂he检测qian准备工作:

1. 请提qian20分zhongcongbing箱中qu出试剂he,平衡zhi室温。

2. 将浓缩洗涤液用shuang蒸水稀释(1:25)。蝐ong猛甑姆舎ui4℃。congbing箱中qu出的浓缩洗涤液ke能有结晶,属于正常xianxiang,ke用40℃水浴微jia热使结晶完全溶解后再配制洗涤襤ai╦ia热温度不要chao过50℃,使用时洗涤液应为室温)。礲i帐褂谩Ⅻ/span>

3. biao准品10000×g离心1分zhong,jia入biao准品&样品稀释液1.0mLzhi冻干biao准品中,旋jin管gai,静置10分zhong,上下颠倒数次,待其充分溶解后,用yi液器将其轻轻混匀(浓度为8000pg/mL)。然后gen据需要jin行倍bi稀释(注:不要直接在穋ong字衘in行倍bi稀释)。建yi配制成以下浓度:按照稀蕋ou椒ㄍ祭?/span> biao准品&样品稀释液直接作为空白孔0ng/mL。如配制5ng/mLbiao准品:qu0.5mL10ng/mL的上shubiao准品jia入含有0.5mLbiao准品&样品稀释液的EP管中,混匀jike,其余浓度依此类推。 

4. 生物素化工作襤ai菏祔anqian计算当次实yansuo需用liang(以100μL/孔计),实际配制时应多配制100-200μL。使用qian15分zhong,以生物素化稀释液稀释浓缩生物素化(1:100)成工作浓秖u5bi帐褂谩Ⅻ/span>

5. 酶结合物工作襤ai菏祔anqian计算当次实yansuo需用liang(以100μL/孔计),实际配制时应多配制100-200μL。使用qian15分zhong,以酶结合物稀释液稀释浓缩HRP酶结合物(1:100)成工作浓秖uⅫ/span>

礲i帐褂谩Ⅻ/span>

转铁蛋白(TF)试剂hebiao准品稀蕋ou椒ㄍ祭haiㄒ狱/span>500μL/管为例,也kegen据实际用liang来稀释,如200μL/管)

            

1. 在各孔中jia入biao准品或样品各100μL 37℃孵育90分zhong

2. jia入100μ生物素化工作襤ai?/span>37℃孵育60分zhong

3. 洗涤3

4. jia入100μL酶结合物工作襤ai?/span> 37℃孵育30分zhong

5. 洗涤5

6. jia入90μL底物溶襤ai?/span> 37℃孵育15分zhong左右

7. jia入50μL终止襤aii在450nm波长处测liangOD

8. 结果计算

yi、cao作因素对ELISA结果的影响ELISAcao作buzhou复杂,cao作不当将yin起较大的wucha。以下xushu各个buzhou中的影响因素。

1.jia样

2.温育

3.洗涤

4.xianse

5.bise

二、灰区的设置通常情况下,ELISA定性实yan以“阳性”和“阴性”来报告结果,两zhe间有yi条分jiexianbei称为“阳性判秞ian怠保?/span>cut-off valueCO值),zhe是定性**测定结果报告的依据。

三、biao本复查ELISA手工检测过cheng复杂,影响因素较多,ji使室na质控在控,也ke能因孔间cha异而造成结果的cha异,因此jia大复查力度是保zheng结果准确性的kekao方法,bi如对HBsAgHBeAgHCV-AbHIV-AbTP-Ab等项目的keyi、弱阳性biao本及少见模shi的检测结果jin行复查。

四、结果判断和报告常用下列ji种方法表示结果:

1.定性测定

2.ban定liang测定 结果yi般以滴度表示。

3.定liang测定 ji用已知liang的biao准品作yi系列稀释后jin行ELISA测定,绘制biao准quxian,结果以优良liang或单位表示。在ELISA定liang检测中meiyi块穋ongΠ宥糱i须绘制xiang应的biao准quxian。

注意事项:

zixi阅读说明书。

检查试剂hebiao签上的有xiao期。如果chao过有xiao期,请勿使用。

按说明书确定suo有试剂齐全(数liang、体ji)。

biao本制备要规范,mei份biao本体ji要按2-3个复孔以上的liang制备(贮存),尽liang穤hong白霰阜荨6唐趎awu法实yanzhe,注意低温保存。

准备好suo有实yan额外suo需物品,(bi如yi液器,试管,清洗器,酶biao仪)。

按说明书将suo用试剂平衡zhi室温,gen据检测biao本数liang确定suo需试剂的liang。

检查试剂henamei种试剂的贮存条件,保zhengsuo有试剂均按照试剂hena说明书推jian的条件存储。

检查不稳定或zhe变质的试剂溶襤ai╞i如沉dian或变se)。有些试剂,bi如biao准品稀释液或zhe检测稀释襤ai琸e能在设计时就含有沉dian物。suo有试剂在滴入酶biao板之qian,bi需充分混詑u6捎诔羋ian物的特性,在jia入酶biao板之qian,bi需不停搅拌。

保zheng充分的孵育时间和温秖uⅫ/span>

切勿使用不同生产批号的试剂qu代xian有试剂或混合xian有试剂。

在混合或溶解蛋白溶液时,避免pao沫产生。

在实yan开始之qian,安pai好实yanliucheng。

在实yan开始之qian,清洁工作台。

若有问题,应与我公司或代理商的技术支持lian系

转铁蛋白(TF)试剂he结果判断:

1. mei个biao准品的OD值减去空白孔的OD值后作图,如设置复孔,ze应qu其平均值计算。以biao准品的浓度为横zuobiao,OD值为zongzuobiao,绘出biao准quxian。亦ke以OD值为横zuobiao,biao准品的浓度为zongzuobiao,绘出biao准quxian。

2. 推jian使用专业的quxian制作软件,如curve expert 1.31.4,在软件jie面既kegen据样品OD值,由biao准quxian查出xiang应的浓度,乘以稀释倍数;亦ke将样品的OD值代入biao准quxian的ni合方chengshi,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,ji为样品的实际浓秖uⅫ/span>

3. 若样品OD值高于biao准quxian上限,应shi当稀释后重测,计算浓度时应乘以稀释倍数。 

转铁蛋白(TF)试剂he有xiao期稳定性考察

本试yan以转铁蛋白(TF)为例

1.  OD值:

正常保存条件下有xiao期na和chao过有xiao期2个yuesuo测OD值bi较

正常有xiao期naOD值: 3.2512.8452.126, 1.859, 1.463, 1.022, 0.710, 0.08

chao过2个yue有xiao期OD值:3.1.7, 2.643, 2.125, 1.796, 1.453, 0.876, 0.432, 0.07

2.huishou率:分别于定值血清及血浆中jia入yi定liang的转铁蛋白(TF)biao准品,重复测定并计算其品均值,huishou率为测定值与理论值的bi率。

        正常保存条件下有xiao期na和过有xiao期2个yueelisa 试剂hehuishou率检测结果

Sample

Conditions

Recovery range(%)

Average(%)

Serum(n=6)

normal

88-106

95

After 12 month

80-100

87

EDTA plasma(n=6)

normal

88-106

97

After 12 month

78-98

87

3. xian性:分别于定值血清及血浆中jia入yi定liang的转铁蛋白(TF)biao准品,并将biao本按1:2,1:4,1:8稀释,xian性范weiji为稀释后样本中转铁蛋白(TF)含liang的测定值与理论值的bi率。

         正常保存条件下有xiao期na和过有xiao期2个yueelisa 试剂hehuixian性检测结果

Sample

Conditions

1:2

1:4

1:8

Serum(n=6)

normal

81-92%

85-90%

89-105%

After 12month

80-88%

82-87%

87-101%

EDTA plasma(n=6)

normal

93-104%

81-97%

91-96%

After 12month

82-95%

75-82%

74-90%

4.  jingmi度:以样苀an舛ㄖ档谋湟煜凳?span>CV表示。CV%=SD/meanx100

批nacha:qu同yi批次试剂he对低值,中值和高值样本jin行定liang检测,mei份样本测定20次,分别计算不同浓度样本的平均值和SD值。

批间cha:选qu 3 个不同批次的试剂he分别对低、中、高值定值样本jin行定liang测定, mei个样本使用同yi试剂he重复测定 8 次,分别计算不同浓度样本的平均值及 SD 值。(批nacha: CV<10%;批间cha: CV<11%)

       正常保存条件下有xiao期na和过有xiao期2个yueelisa 试剂hehuijingmi度检测结果

                    Intra-assay precision

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

16.68

14.22

70.25

62.36

369.75

327.88

SD

1.08

1.25

4.21

5.31

24.69

32.87

CV(%)

6.5

8.8

6.0

8.5

6.6

10

  

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

Sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

18.72

13.68

65.98

61.25

387.22

425.26

SD

1.45

1.52

4.83

5.18

28.49

36.87

CV%

7.7

11.1

7.3

8.5

7.3

8.7

转铁蛋白(TF)试剂he会出xian的问题及解决办法:

1. jia入穋ongχ罩挂汉螅挥形庵祷蛭庵灯汀Ⅻ/span>

a.原因:未jia入酶biao记物。

解决办法:请按照cao作buzhoujin行。

b.原因:试剂hena容物未能充分hui。

解决办法:确定试剂hena容物hui温后再jin行cao作。

c.原因:室温太低。

解决办法:若室温太低(<19),请于cao作buzhou4,shi当延长温育时间。

d.原因:未使用试剂he的清洗液清洗。

解决办法: 请用试剂henasuo提供的清洗液清洗。

e.原因:试剂he已过有xiao期限。

解决办法:请更换成reng在有xiao期限na的试剂he。

2. biao准quxianxian性不佳,或是平行性不好。

a.原因:温育位置避光不好或受到气liu干扰。

解决办法: 请确认温育位置既不透光也不透feng(如抽tina)

b.原因:cao作时间拖太久。

解决办法:请在方法熟练后再jin行cao作。

c.原因:微孔间xiang互污染。

解决办法: jia样品时,请小心勿溅出微孔外,以免造成其它微孔的污染。

d.原因:biao准品或酶biao记物suojia入的liang不yi致。

解决办法:请使用已校正过的yi液qiang,并确保其与吸tou之间有高度mi合性。

e.原因:添jia样品或试剂的cao作方法不正确。

解决办法:jia样品或试剂时,吸tou请勿接触微孔。

f.原因:洗板过cheng发生问题(如管lu堵塞、洗完板后未立刻jin行下yibuzhou)

解决办法:请随时监控洗板ji洗板过cheng,洗完后立jijin行下yibuzhou。

3. 吸光值均偏高(或xian性不够陡)

a.原因:室温太高(>25)

解决办法: 若wu法降低室na温度,请shi当缩短buzhou4的温育时间。

b.原因:底物溶液受到污染。

解决办法: 若发xian底物溶液已呈xian淡蓝se,请不要再使用。

c.原因:穋ongκ奔鋍hao过太久。

解决办法:请控制穋ongκ奔洹Ⅻ/span>

d.原因:酶biao记物污染了hena其它试剂。

解决办法:使用过的吸tou应立ji丢弃,ke避免试剂间xiang互污染,fan是试剂(特别蕅iao竍iao记物与底物溶液)接触过的容器应立ji清洗干净。(先以piao白水浸pao,再以清水chong洗干净,ke确保wucan留)

4. 阴性biao准品的吸光值低于阳性biao准品的吸光值。

a.原因:微孔中的试剂未能充分混合。

解决办法: 试剂jia完后,需轻qiaopan四zhou使其充分混合均詑uⅫ/span>

b.原因:洗板过cheng发生问题(2-f.)

解决办法:请can考2-f.

c.原因:添jia样品或酶biao记物的liang不yi致。

解决办法: 请can考2-d.

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