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人bai介素1α(IL-1α)试ji盒

如guo您对gai竫ing巳さ幕?可以
ming称: 人bai介素1α(IL-1α)试ji盒
型号: IL-1α
展商: ELISA试ji盒
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简单介绍

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人bai介素1α(IL-1α)试ji盒  的详细介绍


bai介素1α(IL-1α)试ji盒

shiyong说明书

bai介素1α(IL-1α)试ji盒ji本yuan理:

采yong双jia心ELISA法。yongkang人IL-1αbaobei于酶标板上,实验时样pin或标准pin中的人IL-1α与baobei结he,you离的成分bei洗去。依次加入生物素化的kang人IL-1α和辣根过氧化物酶标ji的亲和素。kang人IL-1α与结he在baobei上的人IL-1α结he、生物素与亲和素特异性结heer形成**复he物,you离的成分bei洗去。加入显se底物(TMB),TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝se,加终止液后变成黄se。yong酶标仪在450nm波长chu测OD值,人IL-1α浓度与OD450值之jian硈hou龋瑃ong过绘制标譲i呒扑鉩hu样pin中人IL-1α的浓度。

bai介素1α(IL-1α)试ji盒miao述:

英文ming称 Human IL-1α (Interleukin 1 Alpha) ELISA Kit
中文ming称 人bai介素1α(IL-1α)酶联**吸附测定试ji盒
货号 X-EL-H0088c 种属 Human/人
gui格 96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)
检测方法 双jia心法
检测范wei 3.906~250pg/mL 灵敏度 2.344pg/mL

试ji盒组成:

中文ming称

英文ming称

gui格

baocun

  ELISA酶标板(可拆卸)

  Micro ELISA  Plate(Dismountable)

  8×12 / 8×6*

4/-20 #

冻干标准pin

Reference Standard

  2/1 *

4/-20 #

标准pin&样pin稀shi液

Reference Standard & Sample Diluent

  1 20mL/12mL*

4

浓缩生物素化

Concentrated Biotinylated Detection Ab

  1 120μL/70μL*

4/-20 #

生物素化稀shi液

Biotinytated Detection Ab Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩HRP酶结he物

Concentrated HRP Conjugate

  1 120μL/70μL*

4(bi光)

酶结he物稀shi液

HRP Conjugate Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩洗祔ou海?/span>25×

ConcentratedWashBuffer (25×)

  1 30mL/16mL*

4

底物rong液(TMB

Substrate Reagent

  1 10mL/6mL*

4(bi光)

反应终止液

Stop Solution

  1 10mL/6mL*

4

封板覆膜

Plate Sealer

  5/3 *

 

说明书

Product  Description

  1 fen

 

质检报gao

Certificate of Analysis

  1 fen

 

特别说明
*: [96T/48T](打开bao装后请及时检查suo有物pinshi否齐全完整)
#: 一周nashiyong可cun于4℃,需长时jiancunfang或多次shiyong建议cun于-20.                                      

bai介素1α(IL-1α)试ji盒检测莃ai急腹ぷ鳇/span>:

1. 请ti前20分zhong从冰箱中取chu试ji盒,平衡至室温。

2. 将浓缩洗祔ou簓ong双zhengshui稀shi(1:25)。weiyong完的fang回4℃。从冰箱中取chu的浓缩洗祔ou嚎赡苡薪醞ing,属于正chang现象,可yong40℃shui浴微加热shi结jing完全rong解后再配制洗祔ou海尤任露炔灰?/span>50℃,shiyong时洗祔ou河ξ椅拢5比誷hiyong。

3. 标准pin10000×g离心1分zhong,加入标准pin&样pin稀shi液1.0mL至冻干标准pin中,旋jin管盖,静置10分zhong,上下颠倒数次,待qi充分rong解后,yong移液qi将qi轻轻混匀(浓度为8000pg/mL)。ran后根ju需要jinxingbei比稀shi(注:不要直接在反应孔中jinxingbei比稀shi)。建议配制成以下浓度:按照稀shi方法图例 标准pin&样pin稀shi液直接作为空bai孔0ng/mL。如配制5ng/mL标准pin:取0.5mL10ng/mL的上述标准pin加入含有0.5mL标准pin&样pin稀shi液的EP管中,混匀即可,qi余浓度依磗i鄑ui。 

4. 生物素化工作液:实验前计算当次实验suo需yong量(以100μL/孔计),实际配制时应多配制100-200μL。shiyong前15分zhong,以生物素化稀shi襤ehi浓缩生物素化(1:100)成工作浓度。当日shiyong。

5. 酶结he物工作液:实验前计算当次实验suo需yong量(以100μL/孔计),实际配制时应多配制100-200μL。shiyong前15分zhong,以酶结he物稀shi襤ehi浓缩HRP酶结he物(1:100)成工作浓度。

当日shiyong。

bai介素1α(IL-1α)试ji盒标准pin稀shi方法图例:(以500μL/管为例,也可根ju实际yong量来稀shi,如200μL/管)

            

1. 在各孔中加入标准pin或样pin各100μL 37℃fu育90分zhong

2. 加入100μ生物素化工作液,37℃fu育60分zhong

3. 洗涤3

4. 加入100μL酶结he物工作液, 37℃fu育30分zhong

5. 洗涤5

6. 加入90μL底物rong液, 37℃fu育15分zhong左you

7. 加入50μL终止液,立即在450nm波长chu测量OD

8. 结guo计算

一、操作因素对ELISA结guo的影响ELISA操作步zhou复za,操作不当将yinqi较大的误差。以下叙述各个步zhou中的影响因素。

1.加样

2.温育

3.洗涤

4.显se

5.比se

二、灰区的设置tongchang情况下,ELISA定性实验以“yang性”和“yin性”来报gao结guo,两zhejian有一条分jie线bei称为“yang性判duan值ao?/span>cut-off valueCO值),这shi定性**测定结guo报gao的依ju。

san、标本复查ELISA手工检测过cheng复za,影响因素较多,即shi室na质控在控,也可能因孔jian差异er造成结guo的差异,因此加大复查力度shibao证结guo准确性的可靠方法,比如对HBsAgHBeAgHCV-AbHIV-AbTP-Abdeng项目的可疑、弱yang性标本及少见模式的检测结guojinxing复查。

四、结guo判duan和报gaochangyong下列ji种方法表示结guo:

1.定性测定

2.半定量测定 结guo一般以滴度表示。

3.定量测定 即yong已知量的标准pin作一系列稀shi后jinxingELISA测定,绘制标譲i撸醙uo襷a帕ji炕虻ノ槐硎尽T冱/span>ELISA定羕ao觳庵忻恳豢榉从Π宥急匦牖嬷葡嘤Φ谋曜ji摺Ⅻ/span>

注意事项:

仔细阅读说明书。

检查试ji盒标签上的觴ing凇H鏶uo超过觴ing冢雡ushiyong。

按说明书确定suo有试ji齐全(数量、体积)。

标本制备要gui范,每fen标本体积要按2-3个复孔以上的量制备(贮cun),尽量分譩ai霰竑en。短期nawu法实验zhe,注意低温baocun。

准备haosuo有实验额外suo需物pin,(比如移液qi,试管,清洗qi,酶标仪)。

按说明书将suoyong试ji平衡至室温,根ju检测标本数量确定suo需试ji的量。

检查试ji盒na每种试ji的贮cun条件,bao证suo有试jijun按照试ji盒na说明书tui荐的条件cun储。

检查不稳定或zhe变质的试jirong液(比如chen淀或变se)。觴ing┦詊i,比如标准pin稀shi液或zhe检测稀shi液,可能在设计时就含有chen淀物。suo有试ji在滴入酶标板之前,必需充分混匀。er由于chen淀物的特性,在加入酶标板之前,必需不停搅ban。

bao证充分的fu育时jian和温度。

切wushiyong不同生产批号的试ji取代蟴hong惺詊i或混he蟴hong惺詊i。

在混he或rong解蛋bairong液蔮ao琤imianpao沫产生。

在实验开始之前,an排hao实验liucheng。

在实验开始之前,清洁工作台。

若有问题,应与我公司或代理商的技术支持联系

bai介素1α(IL-1α)试ji盒结guo判duan:

1. 每个标准pin的OD值减去空bai孔的OD值后作图,如设置复孔,则应取qi平jun值计算。以标准pin的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,绘chu标譲i摺i可以OD值为横坐标,标准pin的浓度为纵坐标,绘chu标譲i摺Ⅻ/span>

2. tui荐shiyongzhuan业的曲线制作软件,如curve expert 1.31.4,在软件jie面既可根ju样pinOD值,由标譲i卟閏hu相应的浓度,乘以稀shibei数;yi可将样pin的OD值代入标譲i叩哪鈎e方cheng式,计算chu样pin浓度,再乘以稀shibei数,即为样pin的实际浓度。

3. 若样pinOD值gao于标譲i呱蟲ian,应shi当稀shi后重测,计算浓度时应乘以稀shibei数。 

bai介素1α(IL-1α)试ji盒觴ing谖榷ㄐ詋ao察

本试验以bai介素1α(IL-1α)为例

1.  OD值:

正changbaocun条件下觴ing趎a和超过觴ing冱span>2个月suo测OD值比较

正chang觴ing趎aOD值: 3.2512.8452.126, 1.859, 1.463, 1.022, 0.710, 0.08

超过2个月觴ing冱/span>OD值:3.1.7, 2.643, 2.125, 1.796, 1.453, 0.876, 0.432, 0.07

2.回shou率:分别于定值血清及血浆中加入襤uan康命/span>bai介素1α(IL-1α)标准pin,重复测定并计算qipinjun值,回shou率为测定值与理论值的比率。

        正changbaocun条件下觴ing趎a和过觴ing冱span>2个月elisa 试ji盒回shou率检测结guo

Sample

Conditions

Recovery range(%)

Average(%)

Serum(n=6)

normal

88-106

95

After 12 month

80-100

87

EDTA plasma(n=6)

normal

88-106

97

After 12 month

78-98

87

3. 线性:分别于定值血清及血浆中加入襤uan康命/span>bai介素1α(IL-1α)标准pin,并将标本按1:2,1:4,1:8稀shi,线性范wei即为稀shi后样本中bai介素1α(IL-1α)含量的测定值与理论值的比率。

         正changbaocun条件下觴ing趎a和过觴ing冱span>2个月elisa 试ji盒回线性检测结guo

Sample

Conditions

1:2

1:4

1:8

Serum(n=6)

normal

81-92%

85-90%

89-105%

After 12month

80-88%

82-87%

87-101%

EDTA plasma(n=6)

normal

93-104%

81-97%

91-96%

After 12month

82-95%

75-82%

74-90%

4.  精mi度:以样pin测定值的变异系数CV表示。CV%=SD/meanx100

批na差:取同一批次试ji盒对低值,中值和gao值样本jinxing定羕ao觳猓縡en样本测定20次,分别计算不同浓度样本的平jun值和SD值。

批jian差:选取 3 个不同批次的试ji盒分别对低、中、gao值定值样本jinxing定量测定, 每个样本shiyong同一试ji盒重复测定 8 次,分别计算不同浓度样本的平jun值及 SD 值。(批na差: CV<10%;批jian差: CV<11%)

       正changbaocun条件下觴ing趎a和过觴ing冱span>2个月elisa 试ji盒回精mi度检测结guo

                    Intra-assay precision

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

16.68

14.22

70.25

62.36

369.75

327.88

SD

1.08

1.25

4.21

5.31

24.69

32.87

CV(%)

6.5

8.8

6.0

8.5

6.6

10

  

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

Sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

18.72

13.68

65.98

61.25

387.22

425.26

SD

1.45

1.52

4.83

5.18

28.49

36.87

CV%

7.7

11.1

7.3

8.5

7.3

8.7

bai介素1α(IL-1α)试ji盒会chu现的问题及解决办法:

1. 加入反应终止液后,没有吸光值或吸光值偏低。

a.yuan因:wei加入酶标ji物。

解决办法:请按照操作步zhoujinxing。

b.yuan因:试ji盒na容物wei能充分回。

解决办法:确定试ji盒na容物回温后再jinxing操作。

c.yuan因:室温太低。

解决办法:若室温太低(<19),请于操作步zhou4,shi当延长温育时jian。

d.yuan因:weishiyong试ji盒的清洗液清洗。

解决办法: 请yong试ji盒nasuotigong的清洗液清洗。

e.yuan因:试ji盒已过觴ing趚ian。

解决办法:请更huan成reng在觴ing趚ianna的试ji盒。

2. 标譲i呦咝圆患眩騭hi平xing性不hao。

a.yuan因:温育位置bi光不hao或受到气liu干扰。

解决办法: 请确认温育位置既不透光也不透风(如抽屉na)

b.yuan因:操作时jiantuo太jiu。

解决办法:请在方法熟练后再jinxing操作。

c.yuan因:微孔jian相互污染。

解决办法: 加样pin蔮ao胄⌒膚u溅chu微孔外,以mian造成qita微孔的污染。

d.yuan因:标准pin或酶标ji物suo加入的量不一zhi。

解决办法:请shiyong已校正过的移液枪,并确baoqi与吸头之jian有gao度mihe性。

e.yuan因:添加样pin或试ji的操作方法不正确。

解决办法:加样pin或试ji蔮ao非雡u接chu微孔。

f.yuan因e窗骞齝heng发生问题(如管路堵塞、洗完板后wei立kejinxing下一步zhou)

解决办法:请随时监控洗板机洗板过cheng,洗完后立即jinxing下一步zhou。

3. 吸光值jun偏gao(或线性不筯uan伏/span>)

a.yuan因:室温太gao(>25)

解决办法: 若wu法降低室na温度,请shi当缩短步zhou4的温育时jian。

b.yuan因:底物rong液受到污染。

解决办法: 若发现底物rong液已呈现淡蓝se,请不要再shiyong。

c.yuan因:反应时jian超过太jiu。

解决办法:请控謕in从κ眏ian。

d.yuan因ao副阩i物污染了盒naqita试ji。

解决办法:shiyong过的吸头应立即丢qi,可bimian试jijian相互污染,凡shi试ji(特别shi酶标ji物与底物rong液)接chu过的容qi应立即清洗干净。(先以漂baishui浸pao,再以清shuichong洗干净,可确baowu残留)

4. yin性标准pin的吸光值低于yang性标准pin的吸光值。

a.yuan因:微孔中的试jiwei能充分混he。

解决办法: 试ji加完后,需轻敲盘四周shiqi充分混hejun匀。

b.yuan因e窗骞齝heng发生问题(2-f.)

解决办法:请参kao2-f.

c.yuan因:添加样pin或酶标ji物的量不一zhi。

解决办法: 请参kao2-d.

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