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renbai介素1受体拮kangji(IL-1ra/IL-1F3)shiji盒

如guo您对该感兴qude话,ke以
名chen: renbai介素1受体拮kangji(IL-1ra/IL-1F3)shiji盒
xing号: IL-1ra/IL-1F3
展商: ELISAshiji盒
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renbai介素1受体拮kangji(IL-1ra/IL-1F3)shiji盒  de详细介绍


renbai介素1受体拮kangji(IL-1ra/IL-1F3)shiji盒

使用shuo明书

renbai介素1受体拮kangji(IL-1ra/IL-1F3)shiji盒基本原理:

采用shuangjia心ELISAfa。用kangrenIL-1rabao被yu酶标板上,实验时样品或标准品中derenIL-1rayubao被jie合,you离de成分被洗去。依次加入生wu素huadekangrenIL-1rahe辣根guo氧huawu酶标记de亲he素。kangrenIL-1rayujie合在bao被上derenIL-1rajie合、生wu素yu亲he素特异xingjie合而xing成**复合wu,you离de成分被洗去。加入显色底wu(TMB),TMB在辣根guo氧huawu酶decuihuaxia呈现蓝色,加终止液后bian成黄色。用酶标仪在450nmbo长处测OD值,renIL-1ra浓度yuOD450值之间呈正比,tongguo绘制标准曲线计算出样品中renIL-1rade浓度。

renbai介素1受体拮kangji(IL-1ra/IL-1F3)shiji盒miao述:

英文名chen Human IL-1ra/IF-1F3 (Interleukin 1 Receptor Antagonist) ELISA Kit
謝ing拿鹀hen renbai介素1受体拮kangji(IL-1ra/IL-1F3)酶lian**吸附测dingshiji盒
货号 X-EL-H0089c 謟hi簏/span> Human/ren
规格 96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)
检测方fa shuangjia心fa
检测fan围 31.25~2000pg/mL 灵敏度 18.75pg/mL

shiji盒组成:

謝ing拿鹀hen

英文名chen

规格

保存

  ELISA酶标板(ke拆xie)

  Micro ELISA  Plate(Dismountable)

  8×12 / 8×6*

4/-20 #

冻干标准品

Reference Standard

  2/1 zhi*

4/-20 #

标准品&样品稀释液

Reference Standard & Sample Diluent

  1 20mL/12mL*

4

浓缩生wu素hua

Concentrated Biotinylated Detection Ab

  1zhi 120μL/70μL*

4/-20 #

生wu素hua稀释液

Biotinytated Detection Ab Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩HRP酶jie合wu

Concentrated HRP Conjugate

  1zhi 120μL/70μL*

4(避guang)

酶jie合wu稀释液

HRP Conjugate Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩洗涤液(25×

ConcentratedWashBuffer (25×)

  1 30mL/16mL*

4

底wu溶液(TMB

Substrate Reagent

  1 10mL/6mL*

4(避guang)

反ying终止液

Stop Solution

  1 10mL/6mL*

4

封板覆mo

Plate Sealer

  5/3 *

 

shuo明书

Product  Description

  1 fen

 

zhi检报告

Certificate of Analysis

  1 fen

 

特别shuo明
*: [96T/48T](打开bao装后请ji时检cha所觴ing锲肥欠衿肴玾an整)
#: 一周na使用ke存yu4℃,需长时间存放或多次使用建议存yu-20.                                      

renbai介素1受体拮kangji(IL-1ra/IL-1F3)shiji盒检测qian准备工作:

1. 请tiqian20分钟从冰箱中取出shiji盒,平衡至室温。

2. 将浓缩洗涤液用shuangzhengshui稀释(1:25)。未用wande放回4℃。从冰箱中取出de浓缩洗涤液ke能有jie晶,属yu正常现xiang,ke用40℃shui浴微加热使jie晶wan全溶解后再配制洗涤液(加热温度bu要超guo50℃,使用时洗涤液ying为室温)。当ri使用。

3. 标准品yu10000×g离心1分钟,加入标准品&样品稀释液1.0mL至冻干标准品中,旋紧管gai,静置10分钟,上xia颠倒数次,待其充分溶解后,用yi液器将其轻轻混yun(浓度为8000pg/mL)。然后根据需要进行倍比稀释(注:bu要直接在反ying孔中进行倍比稀释)。建议配制成以xia浓度:按照稀释方fa图例 标准品&样品稀释液直接作为空bai孔0ng/mL。如配制5ng/mL标准品:取0.5mL10ng/mLde上述标准品加入含有0.5mL标准品&样品稀释液deEP管中,混yunjike,其yu浓度依此类tui。 

4. 生wu素hua工作液:实验qian计算当次实验所需用量(以100μL/孔计),实际配制时ying多配制100-200μL。使用qian15分钟,以生wu素hua稀释液稀释浓缩生wu素hua(1:100)成工作浓度。当ri使用。

5. 酶jie合wu工作液:实验qian计算当次实验所需用量(以100μL/孔计),实际配制时ying多配制100-200μL。使用qian15分钟,以酶jie合wu稀释液稀释浓缩HRP酶jie合wu(1:100)成工作浓度。

当ri使用。

renbai介素1受体拮kangji(IL-1ra/IL-1F3)shiji盒标准品稀释方fa图例:(以500μL/管为例,也ke根据实际用量来稀释,如200μL/管)

            

1. 在ge孔中加入标准品或样品ge100μL 37℃孵育90分钟

2. 加入100μ生wu素hua工作液,37℃孵育60分钟

3. 洗涤3

4. 加入100μL酶jie合wu工作液, 37℃孵育30分钟

5. 洗涤5

6. 加入90μL底wu溶液, 37℃孵育15分钟左右

7. 加入50μL终止液,立ji在450nmbo长处测量OD

8. jieguo计算

一、操作因素对ELISAjieguodeying响ELISA操作bu骤复杂,操作bu当将引起较大de误cha。以xia叙述ge个bu骤中deying响因素。

1.加样

2.温育

3.洗涤

4.显色

5.比色

二、灰区deshe置tong常情况xia,ELISAdingxing实验以“阳xing”he“阴xing”来报告jieguo,两者间有一条分jie线被chen为“阳xing舩ie现怠保?/span>cut-off valueCO值),这是dingxing**测dingjieguo报告de依据。

三、标本复chaELISA手工检测guo程复杂,ying响因素较多,ji使室nazhikong在kong,也ke能因孔间cha异而zao成jieguodecha异,因此加大复cha力度是保证jieguo准确xingdeke靠方fa,比如对HBsAgHBeAgHCV-AbHIV-AbTP-Ab等项目deke疑、弱阳xing标本ji少见模蔶iang募觳鈐ieguo进行复cha。

四、jieguo舩ie蟞e报告常用xia列几謟hi絝a表示jieguo:

1.dingxing测ding

2.半ding量测ding jieguo一ban以滴度表示。

3.ding量测ding ji用已知量de标准品作一系列稀释后进行ELISA测ding,绘制标准曲线,jieguo以优羓i炕虻ノ槐硎尽T冱/span>ELISAding羕ao觳庵忻恳豢榉磞ing板都必须绘制相yingde标准曲线。

注意事项:

仔细阅秎iao得魇椤Ⅻ/span>

检chashiji盒标签上de有效期。如guo超guo有效期,请勿使用。

按shuo明书确ding所有shiji齐全(数量、体积)。

标本制备要规fan,每fen标本体积要按2-3个复孔以上de量制备(贮存),尽量分譩ai霰竑en。短期na无fa实验者,注意低温保存。

准备好所有实验额外所需wu品,(比如yi液器,shi管,qing洗器,酶标仪)。

按shuo明书将所用shiji平衡至室温,根据检测标本数量确ding所需shijide量。

检chashiji盒na每謟hi詊ide贮存条件,保证所有shiji均按照shiji盒nashuo明书tui荐de条件存储。

检chabu稳ding或者bianzhideshiji溶液(比如chen淀或bian色)。有些shi糽i热绫曜计废∈鸵夯蛘呒觳庀∈鸵海琸e能在she计时jiu含有chen淀wu。所有shiji在滴入酶标板之qian,必需充分混yun。而由yuchen淀wude特xing,在加入酶标板之qian,必需bu停jiao拌。

保证充分de孵育时间he温度。

qie勿使用bu同生chan批号deshiji取代现有shiji或混合现有shiji。

在混合或溶解蛋bai溶液时,避mianpao沫chan生。

在实验开始之qian,安排好实验liu程。

在实验开始之qian,qingjie工作台。

若觴ing侍猓瑈ingyu我公司或代理商de技术zhi持lian系

renbai介素1受体拮kangji(IL-1ra/IL-1F3)shiji盒jieguo舩ie吸/span>:

1. 每个标准品deOD值减去空bai孔deOD值后作图,如she置复孔,则ying取其平均值计算。以标准品de浓度为横坐标,OD值为纵坐标,绘出标准曲线。亦ke以OD值为横坐标,标准品de浓度为纵坐标,绘出标准曲线。

2. tui荐使用专业de曲线制作软件,如curve expert 1.31.4,在软件jiemian既ke根据样品OD值,由标准曲线cha出相yingde浓度,乘以稀释倍数;亦ke将样品deOD值代入标准曲线de拟合方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,ji为样品de实际浓度。

3. 若样品OD值高yu标准曲线上xian,yingshi当稀释后重测,计算浓度时ying乘以稀释倍数。 

renbai介素1受体拮kangji(IL-1ra/IL-1F3)shiji盒有效期稳dingxingkao察

本shi验以bai介素1受体拮kangji(IL-1ra/IL-1F3)为例

1.  OD值:

正常保存条件xia有效期nahe超guo有效期2个月所测OD值比较

正常有效期naOD值: 3.2512.8452.126, 1.859, 1.463, 1.022, 0.710, 0.08

超guo2个月有效期OD值:3.1.7, 2.643, 2.125, 1.796, 1.453, 0.876, 0.432, 0.07

2.回收率:分别yuding值xueqingjixue浆中加入一ding量debai介素1受体拮kangji(IL-1ra/IL-1F3)标准品,重复测ding并计算其品均值,回收率为测ding值yu理论值de比率。

        正常保存条件xia有效期naheguo有效期2个月elisa shiji盒回收率检测jieguo

Sample

Conditions

Recovery range(%)

Average(%)

Serum(n=6)

normal

88-106

95

After 12 month

80-100

87

EDTA plasma(n=6)

normal

88-106

97

After 12 month

78-98

87

3. 线xing:分别yuding值xueqingjixue浆中加入一ding量debai介素1受体拮kangji(IL-1ra/IL-1F3)标准品,并将标本按1:2,1:4,1:8稀释,线xingfan围ji为稀释后样本中bai介素1受体拮kangji(IL-1ra/IL-1F3)含量de测ding值yu理论值de比率。

         正常保存条件xia有效期naheguo有效期2个月elisa shiji盒回线xing检测jieguo

Sample

Conditions

1:2

1:4

1:8

Serum(n=6)

normal

81-92%

85-90%

89-105%

After 12month

80-88%

82-87%

87-101%

EDTA plasma(n=6)

normal

93-104%

81-97%

91-96%

After 12month

82-95%

75-82%

74-90%

4.  jingmi度:以样品测ding值debian异系数CV表示。CV%=SD/meanx100

批nacha:取同一批次shiji簒ie缘椭担兄礹e高值样本进衳iekao觳猓縡en样本测ding20次,分别计算bu同浓度样本de平均值heSD值。

批间cha:选取 3 个bu同批次deshiji盒分别对低、中、高值ding值样本进衳ie坎鈊ing, 每个样本使用同一shiji盒重复测ding 8 次,分别计算bu同浓度样本de平均值ji SD 值。(批nacha: CV<10%;批间cha: CV<11%)

       正常保存条件xia有效期naheguo有效期2个月elisa shiji盒回jingmi度检测jieguo

                    Intra-assay precision

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

16.68

14.22

70.25

62.36

369.75

327.88

SD

1.08

1.25

4.21

5.31

24.69

32.87

CV(%)

6.5

8.8

6.0

8.5

6.6

10

  

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

Sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

18.72

13.68

65.98

61.25

387.22

425.26

SD

1.45

1.52

4.83

5.18

28.49

36.87

CV%

7.7

11.1

7.3

8.5

7.3

8.7

renbai介素1受体拮kangji(IL-1ra/IL-1F3)shiji盒会出现de问题ji解jue办fa:

1. 加入反ying终止液后,没觴ing黦uang值或吸guang值偏低。

a.原因:未加入酶标记wu。

解jue办fa:请按照操作bu骤进行。

b.原因:shiji盒narongwu未能充分回。

解jue办fa:确dingshiji盒narongwu回温后再进行操作。

c.原因:室温tai低。

解jue办fa:若室温tai低(<19),请yu操作bu骤4,shi当延长温育时间。

d.原因:未使用shiji盒deqing洗液qing洗。

解jue办fa: 请用shiji盒na所tigongdeqing洗液qing洗。

e.原因:shiji盒已guo有效期xian。

解jue办fa:请geng换成仍在有效期xiannadeshiji盒。

2. 标准曲线线xingbu佳,或是平行xingbu好。

a.原因:温育位置避guangbu好或受到qiliu干rao。

解jue办fa: 请确认温育位置既bu透guang也bu透风(如抽屉na)

b.原因:操作时间拖tai久。

解jue办fa:请在方fa熟练后再进行操作。

c.原因:微孔间相互污染。

解jue办fa: 加样品时,请小心勿溅出微孔外,以mianzao成其它微孔de污染。

d.原因:标准品或酶标记wu所加入de量bu一致。

解jue办fa:请使用已校正guodeyi液qiang,并确保其yu吸头之间有高度mi合xing。

e.原因:添加样品或shijide操作方fabu正确。

解jue办fa:加样品或shiji时,吸头请勿接触微孔。

f.原因:洗板guo程发生问题(如管路dusai、洗wan板后未立刻进行xia一bu骤)

解jue办fa:请sui时监kong洗板ji洗板guo程,洗wan后立ji进行xia一bu骤。

3. 吸guang值均偏高(或线xingbu够陡)

a.原因:室温tai高(>25)

解jue办fa: 若无fajiang低室na温度,请shi当缩短bu骤4de温育时间。

b.原因:底wu溶液受到污染。

解jue办fa: 若发现底wu溶液已呈现淡蓝色,请bu要再使用。

c.原因:反ying时间超guotai久。

解jue办fa:请kong制反ying时间。

d.原因:酶标记wu污染liao盒na其它shiji。

解jue办fa:使用guode吸头ying立ji丢弃,ke避mianshiji间相互污染,凡是shiji(特别是酶标记wuyu底wu溶液)接触guoderong器ying立jiqing洗干净。(xian以漂baishui浸pao,再以qingshui冲洗干净,ke确保无can留)

4. 阴xing标准品de吸guang值低yu阳xing标准品de吸guang值。

a.原因:微孔中deshiji未能充分混合。

解jue办fa: shiji加wan后,需轻敲盘四周使其充分混合均yun。

b.原因:洗板guo程发生问题(2-f.)

解jue办fa:请参kao2-f.

c.原因:添加样品或酶标记wude量bu一致。

解jue办fa: 请参kao2-d.

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