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人谷bing转氨酶(ALT)试剂hejia格

ru果您对gai感兴趣的话,可以
名称: 人谷bing转氨酶(ALT)试剂hejia格
型号: ALT
展商: ELISA试剂he
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简dan介绍

人谷bing转氨酶(ALT)试剂hejia格采用双夹心ELISAfa。用抗人ALT包bei于酶标板上,实验时样品或标譲i穤hong的人ALT与包bei结合,游离的成穤hi幌慈ァR来渭尤肷飐u化的抗人ALT和辣根guo氧化物酶标记的亲和su。抗人ALT与结合在包bei上的人ALT结合、生物su与亲和su特yi性结合er形成**复合物,游离的成穤hi幌慈ァ<尤胂陨孜?TMB),TMB在辣根guo氧化物酶的催化下呈现蓝色,加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值,人谷bing转氨酶(ALT)试剂henong度与OD450值之间呈正比,通guo绘制标zhun曲线ji算出样品zhong人ALT的nong度。


人谷bing转氨酶(ALT)试剂hejia格  的xiang细介绍


人谷bing转氨酶(ALT)试剂hejia格

使用shuo明书

谷bing转氨酶(ALT)试剂heji本原理:

采用双夹心ELISAfa。用抗人ALT包bei于酶标板上,实验时样品或标譲i穤hong的人ALT与包bei结合,游离的成穤hi幌慈ァR来渭尤肷飐u化的抗人ALT和辣根guo氧化物酶标记的亲和su。抗人ALT与结合在包bei上的人ALT结合、生物su与亲和su特yi性结合er形成**复合物,游离的成穤hi幌慈ァ<尤胂陨孜?TMB),TMB在辣根guo氧化物酶的催化下呈现蓝色,加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值,人ALTnong度与OD450值之间呈正比,通guo绘制标zhun曲线ji算出样品zhong人ALT的nong度。

谷bing转氨酶(ALT)试剂he描述:

英文名称 Human ALT (Alanine Transaminase) ELISA Kit
zhong文名称 人谷bing转氨酶(ALT)酶联**吸附测定试剂he
货号 X-EL-H0312c zhong属 Human/人
规格 96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)
jian测fangfa 双夹心fa
jian测范wei 0.313~20ng/mL 灵敏度 0.188ng/mL

人谷bing转氨酶(ALT)试剂hejia格组成:

zhong文名称

英文名称

规格

保cun

  ELISA酶标板(可拆卸)

  Micro ELISA  Plate(Dismountable)

  8×12 / 8×6*

4/-20 #

冻干标譲i饵/span>

Reference Standard

  2/1 zhi*

4/-20 #

标譲i饵/span>&样品稀释液

Reference Standard & Sample Diluent

  1 20mL/12mL*

4

nong缩生物su化

Concentrated Biotinylated Detection Ab

  1zhi 120μL/70μL*

4/-20 #

生物su化稀释液

Biotinytated Detection Ab Diluent

  1 10mL/6mL*

4

nong缩HRP酶结合物

Concentrated HRP Conjugate

  1zhi 120μL/70μL*

4(避光)

酶结合物稀释液

HRP Conjugate Diluent

  1 10mL/6mL*

4

nong缩洗涤液(25×

ConcentratedWashBuffer (25×)

  1 30mL/16mL*

4

底物溶液(TMB

Substrate Reagent

  1 10mL/6mL*

4(避光)

反应终止液

Stop Solution

  1 10mL/6mL*

4

feng板覆膜

Plate Sealer

  5/3 *

 

shuo明书

Product  Description

  1 

 

质jian报告

Certificate of Analysis

  1 

 

特别shuo明
*: [96T/48T](da开包装后请及时jian查所有物品是否齐全完整)
#: yizhou内使用可cun于4℃,需长时间cun放或多次使用建议cun于-20.                                      

谷bing转氨酶(ALT)试剂hejian测qianzhun备工zuo:

1. 请提qian20穤hong哟觔ing箱zhong取出试剂he,平heng至室温。

2. 将nong缩洗涤液用双蒸shui稀释(1:25)。未用完的放hui4℃。从bing箱zhong取出的nong缩洗涤液可能有结晶,属于正chang现象,可用40℃shui浴微加热使结晶完全溶解后zai配制洗涤液(加热温度不yao超guo50℃,使用时洗涤液应为室温)。当日使用。

3. 标譲i饵/span>10000×g离心1穤hong樱尤氡曜ji饵/span>&样品稀释液1.0mL至冻干标譲i穤hong,旋jin管盖,静置10穤hong樱舷碌叩箂hu次,待其充分溶解后,用移液qi将其轻轻混匀(nong度为8000pg/mL)。ran后根据需yao进行倍眗en∈停ㄗⅲ翰粂aozhi接在反应孔zhong进行倍眗en∈停=ㄒ榕渲瞥梢韵耼ong度:按zhao稀释fangfa图例 标譲i饵/span>&样品稀释液zhi接zuo为kong白孔0ng/mL。ru配制5ng/mL标譲i罚喝狘/span>0.5mL10ng/mL的上述标譲i芳尤牒宵/span>0.5mL标譲i饵/span>&样品稀释液的EP管zhong,混匀即可,其余nong度依此类tui。 

4. 生物su化工zuo液:实验qianji算当次实验所需用量(以100μL/孔ji),实际配制时应多配制100-200μL。使用qian15穤hong樱陨飐u化稀释液稀释nong缩生物su化(1:100)成工zuonong度。当日使用。

5. 酶结合物工zuo液:实验qianji算当次实验所需用量(以100μL/孔ji),实际配制时应多配制100-200μL。使用qian15穤hong樱悦附岷衔锵∈鸵合∈蚽ong缩HRP酶结合物(1:100)成工zuonong度。

当日使用。

谷bing转氨酶(ALT)试剂he标譲i废∈蚮angfa图例:(以500μL/管为例,ye可根据实际用量来稀释,ru200μL/管)

            

1. 在各孔zhong加入标譲i坊蜓犯鳇/span>100μL 37℃孵育90穤hong尹/span>

2. 加入100μ生物su化工zuo液,37℃孵育60穤hong尹/span>

3. 洗涤3

4. 加入100μL酶结合物工zuo液, 37℃孵育30穤hong尹/span>

5. 洗涤5

6. 加入90μL底物溶液, 37℃孵育15穤hong幼笥腰/span>

7. 加入50μL终止液,立即在450nm波长处测量OD

8. 结果ji算

yi、操zuo因su对ELISA结果的影响ELISA操zuobu骤复杂,操zuo不当将引起较大的wu差。以下叙述各gebu骤zhong的影响因su。

1.加样

2.温育

3.洗涤

4.显色

5.比色

er、灰区的设置通chang情况下,ELISA定性实验以“阳性”和“yin性”来报告结果,两者间有yi条分界线bei称为“阳性判断值”(cut-off valueCO值),这是定性**测定结果报告的依据。

san、标本复查ELISA手工jian测guo程复杂,影响因su较多,即使室内质kong在kong,ye可能因縵hun洳顈ier造成结果的差yi,因此加大复查力度是保zheng结果zhun确性的可kaofangfa,比ru对HBsAgHBeAgHCV-AbHIV-AbTP-Ab祌en钅康目梢伞⑷跹粜员瓯炯皊hao见模式的jian测结果进行复查。

四、结果判断和报告chang用下列几zhongfangfa表示结果:

1.定性测定

2.半定量测定 结果yiban以滴度表示。

3.定量测定 即用已zhi量的标譲i穤uoyi系列稀释后进行ELISA测定,绘制标zhun曲线,结果以you良量或dan位表示。在ELISA定量jian测zhong每yi块反应板都bixu绘制相应的标zhun曲线。

注意事项:

仔细阅秎iao得魇椤Ⅻ/span>

jian查试剂he标签上的有xiao期。ru果超guo有xiao期,请勿使用。

按shuo明书确定所有试剂齐全(shu量、ti积)。

标本制备yao规范,每份标本ti积yao按2-3ge复孔以上的量制备(zhucun),尽量穤hong白霰阜荨uan期内无fa实验者,注意di温保cun。

zhun备好所有实验额wai所需物品,(比ru移液qi,试管,清洗qi,酶标仪)。

按shuo明书将所用试剂平heng至室温,根据jian测标本shu量确定所需试剂的量。

jian查试剂he内每zhong试剂的zhucun条件,保zheng所有试剂均按zhao试剂he内shuo明书tui荐的条件cun储。

jian查不稳定或者变质的试剂溶液(比ru沉淀或变色)。有些试剂,比ru标譲i废∈鸵夯蛘遤ian测稀释液,可能在设ji时就含有沉淀物。所有试剂在滴入酶标板之qian,bi需充分混匀。er由于沉淀物的特性,在加入酶标板之qian,bi需不停搅拌。

保zheng充分的孵育时间和温度。

qie勿使用不同生产pi号的试剂取dai现有试剂或混合现有试剂。

在混合或溶解蛋白溶液时,避免泡沫产生。

在实验开始之qian,安排好实验流程。

在实验开始之qian,清jie工zuo台。

若有问题,应与我公薺ing騞ai理商的ji术zhichi联系

谷bing转氨酶(ALT)试剂he结果判断:

1. 每ge标譲i返命/span>OD值减去kong白孔的OD值后zuo图,ru设置复孔,则应取其平均值ji算。以标譲i返膎ong度为heng坐标,OD值为zong坐标,绘出标zhun曲线。亦可以OD值为heng坐标,标譲i返膎ong度为zong坐标,绘出标zhun曲线。

2. tui荐使用专业的曲线制zuo软件,rucurve expert 1.31.4,在软件界面既可根据样品OD值,由标zhun曲线查出相应的nong度,乘以稀释倍shu;亦可将样品的OD值dai入标zhun曲线的ni合fang程式,ji算出样品nong度,zai乘以稀释倍shu,即为样品的实际nong度。

3. 若样品OD值gao于标zhun曲线上限,应适当稀释后重测,ji算nong度时应乘以稀释倍shu。 

谷bing转氨酶(ALT)试剂he有xiao期稳定性考察

本试验以谷bing转氨酶(ALT)为例

1.  OD值:

正chang保cun条件下有xiao期内和超guo有xiao期2ge月所测OD值比较

正chang有xiao期内OD值: 3.2512.8452.126, 1.859, 1.463, 1.022, 0.710, 0.08

超guo2ge月有xiao期OD值:3.1.7, 2.643, 2.125, 1.796, 1.453, 0.876, 0.432, 0.07

2.hui收率:穤hi鹩诙ㄖ祒ue清及xue浆zhong加入yi定量的谷bing转氨酶(ALT)标譲i罚馗床舛úi算其品均值,hui收率为测定值与理论值的比率。

        正chang保cun条件下有xiao期内和guo有xiao期2ge月elisa 试剂hehui收率jian测结果

Sample

Conditions

Recovery range(%)

Average(%)

Serum(n=6)

normal

88-106

95

After 12 month

80-100

87

EDTA plasma(n=6)

normal

88-106

97

After 12 month

78-98

87

3. 线性:穤hi鹩诙ㄖ祒ue清及xue浆zhong加入yi定量的谷bing转氨酶(ALT)标譲i罚⒔瓯景滁span>1:2,1:4,1:8稀释,线性范wei即为稀释后样本zhong谷bing转氨酶(ALT)含量的测定值与理论值的比率。

         正chang保cun条件下有xiao期内和guo有xiao期2ge月elisa 试剂hehui线性jian测结果

Sample

Conditions

1:2

1:4

1:8

Serum(n=6)

normal

81-92%

85-90%

89-105%

After 12month

80-88%

82-87%

87-101%

EDTA plasma(n=6)

normal

93-104%

81-97%

91-96%

After 12month

82-95%

75-82%

74-90%

4.  精密度:以样苀an舛ㄖ档谋鋣i系shuCV表示。CV%=SD/meanx100

pi内差:取同yipi次试剂he对di值,zhong值和gao值样本进行定量jian测,每份样本测定20次,穤hi餵i算不同nong度样本的平均值和SD值。

pi间差:选取 3 ge不同pi次的试剂he穤hi鸲詃i、zhong、gao值定值样本进行定量测定, 每ge样本使用同yi试剂he重复测定 8 次,穤hi餵i算不同nong度样本的平均值及 SD 值。(pi内差: CV<10%;pi间差: CV<11%)

       正chang保cun条件下有xiao期内和guo有xiao期2ge月elisa 试剂hehui精密度jian测结果

                    Intra-assay precision

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

16.68

14.22

70.25

62.36

369.75

327.88

SD

1.08

1.25

4.21

5.31

24.69

32.87

CV(%)

6.5

8.8

6.0

8.5

6.6

10

  

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

Sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

18.72

13.68

65.98

61.25

387.22

425.26

SD

1.45

1.52

4.83

5.18

28.49

36.87

CV%

7.7

11.1

7.3

8.5

7.3

8.7

谷bing转氨酶(ALT)试剂he会出现的问题及解决banfa:

1. 加入反应终止液后,mei有吸光值或吸光值偏di。

a.原因:未加入酶标记物。

解决banfa:请按zhao操zuobu骤进行。

b.原因:试剂he内容物未能充分hui。

解决banfa:确定试剂he内容物hui温后zai进行操zuo。

c.原因:室温太di。

解决banfa:若室温太di(<19),请于操zuobu骤4,适当延长温育时间。

d.原因:未使用试剂he的清洗液清洗。

解决banfa: 请用试剂he内所提供的清洗液清洗。

e.原因:试剂he已guo有xiao期限。

解决banfa:请更换成仍在有xiao期限内的试剂he。

2. 标zhun曲线线性不佳,或是平行性不好。

a.原因:温育位置避光不簃ei蚴艿絨i流干扰。

解决banfa: 请确ren温育位置既不透光ye不透feng(ru抽屉内)

b.原因:操zuo时间拖太久。

解决banfa:请在fangfashu练后zai进行操zuo。

c.原因:微縵hun湎鄅u污染。

解决banfa: 加样品时,请小心勿溅出微孔wai,以免造成其ta微孔的污染。

d.原因:标譲i坊蛎副昙俏锼尤氲牧坎粂i致。

解决banfa:请使用已校正guo的移液枪,并确保其与吸头之间有gao度密合性。

e.原因:tian加样品或试剂的操zuofangfa不正确。

解决banfa:加样品或试剂时,吸头请勿接触微孔。

f.原因:洗板guo程发生问题(ru管路du塞、洗完板后未立刻进行下yibu骤)

解决banfa:请随时监kong洗板机洗板guo程,洗完后立即进行下yibu骤。

3. 吸光值均偏gao(或线性不筯uan伏/span>)

a.原因:室温太gao(>25)

解决banfa: 若无fa降di室内温度,请适当缩duanbu骤4的温育时间。

b.原因:底物溶液受到污染。

解决banfa: 若发现底物溶液已呈现dan蓝色,请不yaozai使用。

c.原因:反应时间超guo太久。

解决banfa:请kong制反应时间。

d.原因:酶标记物污染liaohe内其ta试剂。

解决banfa:使用guo的吸头应立即丢弃,可避免试剂间相hu污染,fan是试剂(特别是酶标记物与底物溶液)接触guo的容qi应立即清洗干jing。(先以漂白shui浸泡,zai以清shui冲洗干jing,可确保无残留)

4. yin性标譲i返奈庵礵i于阳性标譲i返奈庵怠Ⅻ/span>

a.原因:微孔zhong的试剂未能充分混合。

解决banfa: 试剂加完后,需轻敲盘四zhou使其充分混合均匀。

b.原因:洗板guo程发生问题(2-f.)

解决banfa:请参考2-f.

c.原因:tian加样品或酶标记物的量不yi致。

解决banfa: 请参考2-d.

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