资料

人抗miao纙han?*(AMH)试剂盒

如果您对该感兴趣的话,可以
名称: 人抗miao纙han?*(AMH)试剂盒
型号: AMH
zhan商: ELISA试剂盒
文档: 无相guan文档

jian单介绍

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人抗miao纙han?*(AMH)试剂盒  的详细介绍


抗miao纙han?*(AMH)试剂盒

使用说明书

抗miao纙han?*(AMH)试剂盒基ben原理:

ben试剂盒cai用双jia心ELISA法。用抗人AMHbao被yu酶biao板上,实验时yang品或biao准品中的人AMH与bao被结合,游li的成分被xiqu。依次加入sheng物素化的抗人AMH和辣根过氧化物酶biao记的亲和素。抗人AMH与结合在bao被上的人AMH结簒iheng物素与亲和素特异性结合而形成**复合物,游li的成分被xiqu。加入显se底物(TMB),TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈xian蓝se,加zhongzhiye后变成黄se。用酶biao仪在450nm波长处测OD值,人AMH浓度与OD450值之jian硈hou龋ü齢ui制biao准曲xian计算chuyang品中人AMH的浓度。

抗miao纙han?*(AMH)试剂盒描述:

ying文名称 Human AMH (Anti-Mullerian Hormone) ELISA Kit
中文名称 人抗miao纙han?*(AMH)酶联**吸附测定试剂盒
huo号 X-EL-H0317c 种属 Human/人
规格 96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)
检测方法 双jia心法
检测范围 93.75~6000pg/mL 灵min度 56.25pg/mL

试剂盒组成:

中文名称

ying文名称

规格

保cun

  ELISA酶biao板(可拆xie)

  Micro ELISA  Plate(Dismountable)

  8×12 / 8×6*

4/-20 #

dong干biao准品

Reference Standard

  2/1 *

4/-20 #

biao准品&yang品xi释ye

Reference Standard & Sample Diluent

  1 20mL/12mL*

4

浓缩sheng物素化

Concentrated Biotinylated Detection Ab

  1 120μL/70μL*

4/-20 #

sheng物素化xi释ye

Biotinytated Detection Ab Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩HRP酶结合物

Concentrated HRP Conjugate

  1 120μL/70μL*

4(bi光)

酶结合物xi释ye

HRP Conjugate Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩xi涤ye(25×

ConcentratedWashBuffer (25×)

  1 30mL/16mL*

4

底物溶ye(TMB

Substrate Reagent

  1 10mL/6mL*

4(bi光)

反应zhongzhiye

Stop Solution

  1 10mL/6mL*

4

封板竎ai|/span>

Plate Sealer

  5/3 *

 

说明书

Product  Description

  1 

 

质检报告

Certificate of Analysis

  1 

 

特别说明
*: [96T/48T](打开baozhuang后请及时检查所有物品shi否齐全完整)
#: yi周内使用可cunyu4℃,需长时jiancunfang或duo次使用建议cunyu-20.                                      

抗miao纙han?*(AMH)试剂盒检测前准备工作:

1. 请提前20分钟从冰箱中取chu试剂盒,平衡至shi温。

2. 将浓缩xi涤ye用双蒸水xi释(1:25)。wei用完的fang回4℃。从冰箱中取chu的浓缩xi涤ye可能有结晶,属yu正常xian象,可用40℃水浴微加热使结晶完全溶jie后再配制xi涤ye(加热温度bu要超过50℃,使用时xi涤ye应为shi温)。当ri使用。

3. biao准品yu10000×gli心1分钟,加入biao准品&yang品xi释ye1.0mL至dong干biao准品中,旋紧管盖,静zhi10分钟,上下颠倒数次,待其充分溶jie后,用移yeqi将其轻轻混yun(浓度为8000pg/mL)。然后根据需要进行倍比xi释(注:bu要直jie在反应孔中进行倍比xi释)。建议配制成以下浓度:按照xi蕋ou椒ㄍ祭?/span> biao准品&yang品xi释ye直jie作为空白孔0ng/mL。如配制5ng/mLbiao准品:取0.5mL10ng/mL的上述biao准品加入含有0.5mLbiao准品&yang品xi释ye的EP管中,混yun即可,其余浓度依ci类推。 

4. sheng物素化工作ye:实验前计算当次实验所需用量(以100μL/孔计),实际配制时应duo配制100-200μL。使用前15分钟,以sheng物素化xi释yexi释浓缩sheng物素化(1:100)成工作浓度。当ri使用。

5. 酶结合物工作ye:实验前计算当次实验所需用量(以100μL/孔计),实际配制时应duo配制100-200μL。使用前15分钟,以酶结合物xi释yexi释浓缩HRP酶结合物(1:100)成工作浓度。

当ri使用。

抗miao纙han?*(AMH)试剂盒biao准品xi蕋ou椒ㄍ祭海ㄒ狱/span>500μL/管为例,也可根据实际用量来xi释,如200μL/管)

            

1. 在各孔中加入biao准品或yang品各100μL 37℃fuyu90分钟

2. 加入100μsheng物素化工作ye,37℃fuyu60分钟

3. xi涤3

4. 加入100μL酶结合物工作ye, 37℃fuyu30分钟

5. xi涤5

6. 加入90μL底物溶ye, 37℃fuyu15分钟左右

7. 加入50μLzhongzhiye,立即在450nm波长处测量OD

8. 结果计算

yi、操作因素对ELISA结果的影xiangELISA操作步zhou复杂,操作bu当将yinqi絰i蟮奈蟛睢R韵聏u述各个步zhou中的影xiang因素。

1.加yang

2.温yu

3.xi涤

4.显se

5.比se

二、灰qu的设zhi通常情况下,ELISA定性实验以“阳性”和“阴性”来报告结果,两者jian有yi条分jiexian被称为“阳性舩iexian怠保?/span>cut-off valueCO值),这shi定性**测定结果报告的依据。

san、biaoben复查ELISA蕑hiぜ觳夤谈丛樱皒iang因素较duo,即使shi内质控在控,也可能因孔jian差异而造成结果的差异,因ci加大复查力度shi保zheng结果准确性的可靠方法,比如对HBsAgHBeAgHCV-AbHIV-AbTP-Ab等项目的可yi、ruo阳性biaoben及少见模式的检测结果进行复查。

四、结果舩ie虾捅ǜ娉S孟铝屑钢址椒ū硎窘峁裹/span>

1.定性测定

2.半定量测定 结果yi般以di度表示。

3.定量测定 即用yi知量的biao准品作yi系列xi释后进行ELISA测定,hui制biao准曲xian,结果以you良量或单位表示。在ELISA定量检测中每yi块反应板都必须hui制相应的biao准曲xian。

注意事项:

仔细阅读说明书。

检查试剂盒biao签上的有效qi。如果超过有效qi,请wu使用。

癱i得魇槿范ㄋ惺约疗肴ㄊ俊⑻錴i)。

biaoben制备要规范,每份biaoben体ji要按2-3个复孔以上的量制备(贮cun),尽量分zhuang做备份。短qi内无法实验者,注意低温保cun。

准备hao所有实验额wai所需物品,(比如移yeqi,试管,清xiqi,酶biao仪)。

癱i得魇榻檬约疗胶庵羢hi温,根据检测biaoben数量确定所需试剂的量。

检查试剂盒内每种试剂的贮cun条件,保zheng所有试剂jun按照试剂盒内说明书推荐的条件cun储。

检查bu稳定或者变质的试剂溶ye(比如沉淀或变se)。有些试剂,比如biao准品xi释ye或者检测xi释ye,可能在设计蔮en秃谐恋砦铩K惺约猎赿i入酶biao板之前,必需充分混yun。而由yu沉淀物的特性,在加入酶biao板之前,必需bu停搅拌。

保zheng充分的fuyu时jian和温度。

切wu使用bu同shengchan批号的试剂取daixian有试剂或混合xian有试剂。

在混合或溶jie蛋白溶ye时,bimian泡沫chansheng。

在实验开始之前,an排hao实验流程。

在实验开始之前,清洁工作台。

若有问题,应与我gong司或dai理商的技术支持联系

抗miao纙han?*(AMH)试剂盒结果舩ie吸/span>:

1. 每个biao准品的OD值jianqu空白孔的OD值后作图,如设zhi复孔,则应取其平jun值计算。以biao准品的浓度为横坐biao,OD謉i葑鴅iao,huichubiao准曲xian。yi可以OD謉i嶙鴅iao,biao准品的浓度为纵坐biao,huichubiao准曲xian。

2. 推荐使用专业的曲xian制作ruan件,如curve expert 1.31.4,在ruan件jie面既可根据yang品OD值,由biao准曲xian查chu相应的浓度,乘以xi释倍数;yi可将yang品的OD值dai入biao准曲xian的拟合方程式,计算chuyang苀angǘ龋俪艘詘i释倍数,即为yang品的实际浓度。

3. 若yang品OD值高yubiao准曲xian上限,应适当xi释后重测,计算浓度时应乘以xi释倍数。 

抗miao纙han?*(AMH)试剂盒有效qi稳定性考察

ben试验以抗miao纙han?*(AMH)为例

1.  OD值:

正常保cun条件下有效qi内和超过有效qi2个月所测OD值比较

正常有效qi内OD值: 3.2512.8452.126, 1.859, 1.463, 1.022, 0.710, 0.08

超过2个月有效qiOD值:3.1.7, 2.643, 2.125, 1.796, 1.453, 0.876, 0.432, 0.07

2.回shou率:分别yu定值xue清及xuejiang中加入yi定量的抗miao纙han?*(AMH)biao准品,重复测定并计算其品jun值,回shou率为测定值与理lun值的比率。

        正常保cun条件下有效qi内和过有效qi2个月elisa 试剂盒回shou率检测结果

Sample

Conditions

Recovery range(%)

Average(%)

Serum(n=6)

normal

88-106

95

After 12 month

80-100

87

EDTA plasma(n=6)

normal

88-106

97

After 12 month

78-98

87

3. xian性:分别yu定值xue清及xuejiang中加入yi定量的抗miao纙han?*(AMH)biao准品,并将biaoben按1:2,1:4,1:8xi释,xian性范围即为xi释后yangben中抗miao纙han?*(AMH)含量的测定值与理lun值的比率。

         正常保cun条件下有效qi内和过有效qi2个月elisa 试剂盒回xian性检测结果

Sample

Conditions

1:2

1:4

1:8

Serum(n=6)

normal

81-92%

85-90%

89-105%

After 12month

80-88%

82-87%

87-101%

EDTA plasma(n=6)

normal

93-104%

81-97%

91-96%

After 12month

82-95%

75-82%

74-90%

4.  精密度:以yang品测定值的变异系数CV表示。CV%=SD/meanx100

批内差:取同yi批次试剂簒ie缘椭担兄岛透咧祔angben进衳ie考觳猓糠輞angben测定20次,分别计算bu同浓度yangben的平jun值和SD值。

批jian差:xuan取 3 个bu同批次的试剂盒分别对低、中、高值定值yangben进衳ie坎舛ǎ 每个yangben使用同yi试剂盒重复测定 8 次,分别计算bu同浓度yangben的平jun值及 SD 值。(批内差: CV<10%;批jian差: CV<11%)

       正常保cun条件下有效qi内和过有效qi2个月elisa 试剂盒回精密度检测结果

                    Intra-assay precision

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

16.68

14.22

70.25

62.36

369.75

327.88

SD

1.08

1.25

4.21

5.31

24.69

32.87

CV(%)

6.5

8.8

6.0

8.5

6.6

10

  

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

Sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

18.72

13.68

65.98

61.25

387.22

425.26

SD

1.45

1.52

4.83

5.18

28.49

36.87

CV%

7.7

11.1

7.3

8.5

7.3

8.7

抗miao纙han?*(AMH)试剂盒会chuxian的问题及jie决办法:

1. 加入反应zhongzhiye后,mei有吸光值或吸光值偏低。

a.原因:wei加入酶biao记物。

jie决办法:请按照操作步zhou进行。

b.原因:试剂盒内rong物wei能充分回。

jie决办法:确定试剂盒内rong物回温后再进行操作。

c.原因:shi温太低。

jie决办法:若shi温太低(<19),请yu操作步zhou4,适当yan长温yu时jian。

d.原因:wei使用试剂盒的清xiye清xi。

jie决办法: 请用试剂盒内所提供的清xiye清xi。

e.原因:试剂盒yi过有效qi限。

jie决办法:请geng换成仍在有效qi限内的试剂盒。

2. biao准曲xianxian性bu佳,或shi平行性buhao。

a.原因:温yu位zhibi光bu簃ei蚴躣ao气流干扰。

jie决办法: 请确认温yu位zhi既bu透光也bu透feng(如抽ti内)

b.原因:操作时jian拖太久。

jie决办法:请在方法熟练后再进行操作。

c.原因:微孔jian相互污染。

jie决办法: 加yang品时,请小心wu溅chu微孔wai,以mian造成其ta微孔的污染。

d.原因:biao准品或酶biao记物所加入的量buyi致。

jie决办法:请使用yi校正过的移ye枪,并确保其与吸tou之jian有高度密合性。

e.原因:添加yang品或试剂的操作方法bu正确。

jie决办法:加yang品或试剂时,吸tou请wujie触微孔。

f.原因:xi板过程发sheng问题(如管ludu塞、xi完板后wei立ke进行下yi步zhou)

jie决办法:请随时监控xi板机xi板过程,xi完后立即进行下yi步zhou。

3. 吸光值jun偏高(或xian性bu够陡)

a.原因:shi温太高(>25)

jie决办法: 若无法降低shi内温度,请适当缩短步zhou4的温yu时jian。

b.原因:底物溶ye受dao污染。

jie决办法: 若发xian底物溶yeyi呈xiandan蓝se,请bu要再使用。

c.原因:反应时jian超过太久。

jie决办法:请控制反应时jian。

d.原因ao竍iao记物污染了盒内其ta试剂。

jie决办法:使用过的吸tou应立即丢弃,可bimian试剂jian相互污染,凡shi试剂(特别蕅iao竍iao记物与底物溶ye)jie触过的rongqi应立即清xi干净。(xian以漂白水浸泡,再以清水冲xi干净,可确保无残留)

4. 阴性biao准品的吸光值低yu阳性biao准品的吸光值。

a.原因:微孔中的试剂wei能充分混簒iⅫ/span>

jie决办法: 试剂加完后,需轻qiao盘四周使其充分混合junyun。

b.原因:xi板过程发sheng问题(2-f.)

jie决办法:请can考2-f.

c.原因:添加yang品或酶biao记物的量buyi致。

jie决办法: 请can考2-d.

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