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人fang基硫suan酯酶B(ARSB)试jihe

如果您对该感xing趣的话,可以
名称: 人fang基硫suan酯酶B(ARSB)试jihe
型号: ARSB
展商: ELISA试jihe
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简单介绍

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人fang基硫suan酯酶B(ARSB)试jihe  的详细介绍


fang基硫suan酯酶B(ARSB)试jihe

shi用说明书

fang基硫suan酯酶B(ARSB)试jihe基ben原理:

ben试jihe采用双夹xinELISA法。觤ei谷薃RSBbao被于酶标板shang,实验shi样品huo标譲i穤hong的人ARSByubao被结he,游li的成分被xi去。依次加入生物素化的抗人ARSBhe辣根过氧化物酶标记的亲he素。抗人ARSByu结he在bao被shang的人ARSB结he、生物素yu亲he素特异性结he而形成**复he物,游li的成分被xi去。加入显色底物(TMB),TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色,加终zhi液hou变成黄色。用酶标仪在450nmbo长chu测ODzhi,人ARSB浓度yuOD450zhi之间呈正比,tong过绘zhi标准曲线ji算chu样品zhong人ARSB的浓度。

fang基硫suan酯酶B(ARSB)试jihe描述:

ying文名称 Human ARSB (Arylsulfatase B) ELISA Kit
zhong文名称 人fang基硫suan酯酶B(ARSB)酶联**吸附测ding试jihe
货号 X-EL-H0419c zhong属 Human/人
规格 96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)
检测方法 双夹xin法
检测范围 0.156~10ng/mL 灵敏度 0.094ng/mL

试jihe组成:

zhong文名称

ying文名称

规格

保cun

  ELISA酶标板(可拆卸)

  Micro ELISA  Plate(Dismountable)

  8×12 / 8×6*

4/-20 #

冻干标譲i饵/span>

Reference Standard

  2/1 *

4/-20 #

标譲i饵/span>&样品稀释液

Reference Standard & Sample Diluent

  1 20mL/12mL*

4

浓缩生物素化

Concentrated Biotinylated Detection Ab

  1 120μL/70μL*

4/-20 #

生物素化稀释液

Biotinytated Detection Ab Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩HRP酶结he物

Concentrated HRP Conjugate

  1 120μL/70μL*

4(避光)

酶结he物稀释液

HRP Conjugate Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩xi涤液(25×

ConcentratedWashBuffer (25×)

  1 30mL/16mL*

4

底物溶液(TMB

Substrate Reagent

  1 10mL/6mL*

4(避光)

fan应终zhi液

Stop Solution

  1 10mL/6mL*

4

feng板竎ai|/span>

Plate Sealer

  5/3 *

 

说明书

Product  Description

  1 

 

质检报告

Certificate of Analysis

  1 

 

特别说明
*: [96T/48T](打开baozhuanghou请及shi检查所有物品是否齐quan完zheng)
#: yi周内shi觤ei蒫un于4℃,需长shi间cun放huo多次shi用建议cun于-20.                                      

fang基硫suan酯酶B(ARSB)试jihe检测前准备工作:

1. 请提前20穤hong哟颖鋤hong取chu试ji簒iao胶鈠hi室温。

2. 将浓缩xi涤液用双蒸shui稀释(1:25)。未用完的放回4℃。从冰箱zhong取chu的浓缩xi涤液可能有结晶,属于正常现象,可用40℃shui浴微加热shi结晶完quan溶jiehouzai配zhixi涤液(加热温度不yao超过50℃,shi用shixi涤液应为室温)。当rishi用。

3. 标譲i饵/span>10000×glixin1穤hong樱尤氡曜ji饵/span>&样品稀释液1.0mLzhi冻干标譲i穤hong,旋jin管盖,jing置10穤hong樱瑂hang下dian倒数次,待qi充分溶jiehou,用移液器将qiqingqing混匀(浓度为8000pg/mL)。然hou根据需yaojinxing倍比稀释(注:不yao直接在fan应孔zhongjinxing倍比稀释)。建议配zhi成以下浓度:按照稀释方法图li 标譲i饵/span>&样品稀释液直接作为空白孔0ng/mL。如配zhi5ng/mL标譲i罚喝狘/span>0.5mL10ng/mL的shang述标譲ifang尤牒宵/span>0.5mL标譲i饵/span>&样品稀释液的EP管zhong,混匀即可,qi余浓度依此lei推。 

4. 生物素化工作液:实验前ji算当次实验所需用liang(以100μL/孔ji),实际配zhishi应多配zhi100-200μL。shi觤en?/span>15穤hong樱陨锼鼗∈鸵he∈团ㄋ跎锼鼗?/span>(1:100)成工作浓度。当rishi用。

5. 酶结he物工作液:实验前ji算当次实验所需用liang(以100μL/孔ji),实际配zhishi应多配zhi100-200μL。shi觤en?/span>15穤hong樱悦附醜e物稀释襤e∈团ㄋ酎/span>HRP酶结he物(1:100)成工作浓度。

当rishi用。

fang基硫suan酯酶B(ARSB)试jihe标譲i废∈头椒ㄍ糽i:(以500μL/管为li,ye可根据实际用liang来稀释,如200μL/管)

            

1. 在各孔zhong加入标譲i穐uo样品各100μL 37℃孵yu90穤hong尹/span>

2. 加入100μ生物素化工作液,37℃孵yu60穤hong尹/span>

3. xi涤3

4. 加入100μL酶结he物工作液, 37℃孵yu30穤hong尹/span>

5. xi涤5

6. 加入90μL底物溶液, 37℃孵yu15穤hong幼笥腰/span>

7. 加入50μL终zhi液,立即在450nmbo长chu测liangODzhi

8. 结果ji算

yi、操作yin素对ELISA结果的影xiangELISA操作bu骤复杂,操作不当将引起絰i蟮奈蟛睢R韵聏u述各个bu骤zhong的影xiangyin素。

1.加样

2.温yu

3.xi涤

4.显色

5.比色

二、灰qu的设置tong常情kuang下,ELISAding性实验以“阳性”he“阴性”来报告结果,liang者间有yi条分界线被称为“阳性判断zhi”(cut-off valueCOzhi),这是ding性**测ding结果报告的依据。

三、标ben复查ELISAshou工检测过程复杂,影xiangyin素较多,即shi室内质控在控,ye可能yin孔间差异而造成结果的差异,yin此加大复查力度是保证结果准que性的可kao方法,比如对HBsAgHBeAgHCV-AbHIV-AbTP-Ab等项目的可疑、ruo阳性标ben及少见模蔶iang募觳饨峁鹙inxing复查。

si、结果判断he报告常用下列jizhong方法表示结果:

1.ding性测ding

2.bandingliang测ding 结果yi般以滴度表示。

3.dingliang测ding 即用已知liang的标譲i纷鱵i系列稀释houjinxingELISA测ding,绘zhi标准曲线,结果以优良lianghuo单位表示。在ELISAdingliang检测zhongmeiyi块fan应板都必须绘zhi相应的标准曲线。

注意事项:

仔细阅读说明书。

检查试jihe标签shang的觴ingi。如果超过觴ingi,请勿shi用。

按说明书queding所有试ji齐quan(数liang、体积)。

标benzhi备yao规范,mei份标ben体积yao按2-3个复孔以shang的liangzhi备(zhucun),尽liang分zhuang做备份。短qi内wu法实验者,注意低温保cun。

准备好所有实验额外所需物品,(比如移液器,试管,清xi器,酶标仪)。

按说明书将所用试ji平衡zhi室温,根据检测标ben数liangqueding所需试ji的liang。

检查试ji簒in趍eizhong试ji的zhucun条件,保证所有试ji均按照试ji簒in谒得魇橥萍龅奶跫unchu。

检查不稳dinghuo者变质的试ji溶液(比如沉dianhuo变色)。觴ing┦詊i,比如标譲i废∈鸵篽uo者检测稀释液,可能在设jishi就含有沉dian物。所有试ji在滴入酶标板之前,必需充分混匀。而由于沉dian物的特性,在加入酶标板之前,必需不停jiaoban。

保证充穤hi姆鮵ushi间he温度。

切勿shi用不同生产批号的试ji取代现有试jihuo混he现有试ji。

在混hehuo溶jie蛋白溶液shi,避免paomo产生。

在实验开始之前,安排好实验流程。

在实验开始之前,清洁工作tai。

ruo有问ti,应yu我公司huo代理商的技shu支硓hi袋/span>

fang基硫suan酯酶B(ARSB)试jihe结果判断:

1. mei个标譲i返命/span>ODzhijian去空白孔的ODzhihou作图,如设置复孔,则应取qi平均zhiji算。以标譲i返呐ǘ任嶙辏?/span>ODzhi为纵坐标,绘chu标准曲线。亦可以ODzhi为横坐标,标譲i返呐ǘ任葑辏鎐hu标准曲线。

2. 推荐shi用专业的曲线zhi作软件,如curve expert 1.3huo1.4,在软件界面既可根据样品ODzhi,由标准曲线查chu相应的浓度,乘以稀释倍数;亦可将样品的ODzhi代入标准曲线的拟he方程shi,ji算chu样品浓度,zai乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。

3. ruo样品ODzhi高于标准曲线shang限,应适当稀释hou重测,ji算浓度shi应乘以稀释倍数。 

fang基硫suan酯酶B(ARSB)试jihe觴ingi稳ding性考察

ben试验以fang基硫suan酯酶B(ARSB)为li

1.  ODzhi:

正常保cun条件下觴ingi内he超过觴ingi2个月所测ODzhi比较

正常觴ingi内ODzhi: 3.2512.8452.126, 1.859, 1.463, 1.022, 0.710, 0.08

超过2个月觴ingiODzhi:3.1.7, 2.643, 2.125, 1.796, 1.453, 0.876, 0.432, 0.07

2.回收率:分别于dingzhi血清及血jiangzhong加入yidingliang的fang基硫suan酯酶B(ARSB)标譲i罚馗床鈊ing并ji算qi品均zhi,回收率为测dingzhiyu理论zhi的比率。

        正常保cun条件下觴ingi内he过觴ingi2个月elisa 试jihe回收率检测结果

Sample

Conditions

Recovery range(%)

Average(%)

Serum(n=6)

normal

88-106

95

After 12 month

80-100

87

EDTA plasma(n=6)

normal

88-106

97

After 12 month

78-98

87

3. 线性:分别于dingzhi血清及血jiangzhong加入yidingliang的fang基硫suan酯酶B(ARSB)标譲i罚⒔阞en按1:2,1:4,1:8稀释,线性范围即为稀释hou样benzhongfang基硫suan酯酶B(ARSB)含liang的测dingzhiyu理论zhi的比率。

         正常保cun条件下觴ingi内he过觴ingi2个月elisa 试jihe回线性检测结果

Sample

Conditions

1:2

1:4

1:8

Serum(n=6)

normal

81-92%

85-90%

89-105%

After 12month

80-88%

82-87%

87-101%

EDTA plasma(n=6)

normal

93-104%

81-97%

91-96%

After 12month

82-95%

75-82%

74-90%

4.  精mi度:以样品测dingzhi的变异系数CV表示。CV%=SD/meanx100

批内差:取同yi批次试jihe对低zhi,zhongzhihe高zhi样benjinxingdingliang检测,mei份样眏ing鈊ing20次,分别ji算不同浓度样ben的平均zhiheSDzhi。

批间差:选取 3 个不同批次的试jihe分别对低、zhong、高zhidingzhi样benjinxingdingliang测ding, mei个样benshi用同yi试jihe重复测ding 8 次,分别ji算不同浓度样ben的平均zhi及 SD zhi。(批内差: CV<10%;批间差: CV<11%)

       正常保cun条件下觴ingi内he过觴ingi2个月elisa 试jihe回精mi度检测结果

                    Intra-assay precision

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

16.68

14.22

70.25

62.36

369.75

327.88

SD

1.08

1.25

4.21

5.31

24.69

32.87

CV(%)

6.5

8.8

6.0

8.5

6.6

10

  

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

Sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

18.72

13.68

65.98

61.25

387.22

425.26

SD

1.45

1.52

4.83

5.18

28.49

36.87

CV%

7.7

11.1

7.3

8.5

7.3

8.7

fang基硫suan酯酶B(ARSB)试jihehuichu蟴hi奈蕋i及jie决ban法:

1. 加入fan应终zhi液hou,没有吸光zhihuo吸光zhi偏低。

a.原yin:未加入酶标记物。

jie决ban法:请按照操作bu骤jinxing。

b.原yin:试ji簒in谌菸镂茨艹浞只亍Ⅻ/span>

jie决ban法:queding试ji簒in谌菸锘匚耯ouzaijinxing操作。

c.原yin:室温太低。

jie决ban法:ruo室温太低(<19),请于操作bu骤4,适当延长温yushi间。

d.原yin:未shi用试jihe的清xi液清xi。

jie决ban法: 请用试ji簒in谒峁┑那鍃i液清xi。

e.原yin:试jihe已过觴ingi限。

jie决ban法:请更换成仍在觴ingi限内的试jihe。

2. 标准曲线线性不佳,huo是平xing性不好。

a.原yin:温yu位置避光不好huo受dao气流干扰。

jie决ban法: 请que认温yu位置既不透光ye不透风(如抽屉内)

b.原yin:操作shi间拖太久。

jie决ban法:请在方法熟练houzaijinxing操作。

c.原yin:微孔间相互wu染。

jie决ban法: 加样品shi,请小xin勿溅chu微孔外,以免造成qita微孔的wu染。

d.原yin:标譲i穐uo酶标记物所加入的liang不yi致。

jie决ban法:请shi用已xiao正过的移液qiang,并que保qiyu吸头之间有高度mihe性。

e.原yin:添加样品huo试ji的操作方法不正que。

jie决ban法:加样品huo试jishi,吸头请勿接chu微孔。

f.原yin:xi板过程发生问ti(如管路堵sai、xi完板hou未立kejinxing下yibu骤)

jie决ban法:请随shi监控xi板机xi板过程,xi完hou立即jinxing下yibu骤。

3. 吸光zhi均偏高(huo线性不够陡)

a.原yin:室温太高(>25)

jie决ban法: ruowu法jiang低室内温度,请适当缩短bu骤4的温yushi间。

b.原yin:底物溶液受daowu染。

jie决ban法: ruo发蟴hi孜锶芤阂殉氏zhi渡氩粂aozaishi用。

c.原yin:fan应shi间超过太久。

jie决ban法:请控zhifan应shi间。

d.原yin:酶标记物wu染了簒in趒ita试ji。

jie决ban法:shi用过的吸头应立即丢弃,可避免试ji间相互wu染,凡是试ji(特别是酶标记物yu底物溶液)接chu过的容器应立即清xi干净。(xian以漂白shui浸pao,zai以清shui冲xi干净,可que保wu残留)

4. 阴性标譲i返奈鈠hi低于阳性标譲i返奈鈠hi。

a.原yin:微孔zhong的试ji未能充分混he。

jie决ban法: 试ji加完hou,需qing敲盘si周shiqi充分混he均匀。

b.原yin:xi板过程发生问ti(2-f.)

jie决ban法:请参考2-f.

c.原yin:添加样品huo酶标记物的liang不yi致。

jie决ban法: 请参考2-d.

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