资料

人瘦su受体(LEPR)试剂盒

如果您对竚ei衳ing趣的话,ke以
名称: 人瘦su受体(LEPR)试剂盒
型号: LEPR
zhan商: ELISA试剂盒
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简dan介绍

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人瘦su受体(LEPR)试剂盒  的详细介绍


瘦su受体(LEPR)试剂盒

使用shuo明书

瘦su受体(LEPR)试剂盒基本原理:

本试剂盒采用shuang夹心ELISA法。觤ei谷薒EPRbao被于meibiao板上,实yan时样品或biao准品中的人LEPR与bao被结合,游离的成分被洗去。依次加入生物su化的抗人LEPR和辣genguo氧化物meibiao记的亲和su。抗人LEPR与结合在bao被上的人LEPR结合、生物su与亲和su特yi性结合而xing成**fu合物,游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB),TMB在辣genguo氧化物mei的催化下呈现蓝色,加终止液后变成黄色。用meibiaoyi在450nmbo长处测OD值,人LEPR浓度与OD450值之间呈正比,tongguohuizhibiao准曲线计算chu样品中人LEPR的浓度。

瘦su受体(LEPR)试剂盒描shu:

英文名称 Human LEPR (Leptin Receptor) ELISA Kit
謝ing拿劈/span> 人瘦su受体(LEPR)mei联**吸附测定试剂盒
货号 X-EL-H0093c zhong属 Human/人
gui格 96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)
jian测方法 shuang夹心法
jian测范围 0.313~20ng/mL 灵min度 0.188ng/mL

试剂盒组成:

謝ing拿劈/span>

英文名称

gui格

保存

  ELISAmeibiao板(ke拆卸)

  Micro ELISA  Plate(Dismountable)

  8×12 / 8×6*

4/-20 #

冻干biao准品

Reference Standard

  2/1 *

4/-20 #

biao准品&样品稀释液

Reference Standard & Sample Diluent

  1 20mL/12mL*

4

浓缩生物su化

Concentrated Biotinylated Detection Ab

  1 120μL/70μL*

4/-20 #

生物su化稀释液

Biotinytated Detection Ab Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩HRPmei结合物

Concentrated HRP Conjugate

  1 120μL/70μL*

4(避光)

mei结合物稀释液

HRP Conjugate Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩洗涤襤ai?/span>25×

ConcentratedWashBuffer (25×)

  1 30mL/16mL*

4

底物溶襤ai?/span>TMB

Substrate Reagent

  1 10mL/6mL*

4(避光)

反ying终止液

Stop Solution

  1 10mL/6mL*

4

封板覆mo

Plate Sealer

  5/3 *

 

shuo明书

Product  Description

  1 fen

 

质jianbao告

Certificate of Analysis

  1 fen

 

特别shuo明
*: [96T/48T](打开bao装后请ji时jiancha所觴ing锲穝hi否齐quanwanzheng)
#: 一zhou内使用ke存于4℃,xu长时间存放或多次使用建议存于-20.                                      

瘦su受体(LEPR)试剂盒jian测莃ai糱ei工作:

1. 请提前20穤hong哟颖渲腥hu试剂簒iao胶庵潦椅longⅫ/span>

2. 将浓缩洗涤液用shuang蒸水稀释(1:25)。未用wan的放回4℃。从冰箱中取chu的浓缩洗涤液ke能有结晶,属于正常现象,ke用40℃水浴wei加热使结晶wanquan溶解后再配zhi洗涤襤ai尤葁en度不要超guo50℃,使用时洗涤液ying为室wen)。当日使用。

3. biao准品10000×g离心1穤hong樱尤隻iao准品&样品稀释液1.0mL至冻干biao准品謝iao瑇uan紧管盖,静置10穤hong樱舷碌叩故危琩ai其chong分溶解后,用移液器将其轻轻混匀(浓度为8000pg/mL)。ran后genjuxu要jin行倍比稀释(注:不要直接在反ying孔中jin行倍比稀释)。建议配zhi成以下浓度:按照稀蕋ou椒ㄍ祭?/span> biao准品&样品稀释液直接作为空bai孔0ng/mL。如配zhi5ng/mLbiao准品:取0.5mL10ng/mL的上shubiao准品加入含有0.5mLbiao准品&样品稀释液的EP管謝iao煸燃磌e,其余浓度依磗i鄑ui。 

4. 生物su化工作襤ai菏祔an前计算当次实yan所xu用量(以100μL/孔计),实际配zhi时ying多配zhi100-200μL。使用前15穤hong樱陨飐u化稀释液稀释浓缩生物su化(1:100)成工作浓度。当日使用。

5. mei结合物工作襤ai菏祔an前计算当次实yan所xu用量(以100μL/孔计),实际配zhi时ying多配zhi100-200μL。使用前15穤hong樱詍ei结合物稀释液稀释浓缩HRPmei结合物(1:100)成工作浓度。

当日使用。

瘦su受体(LEPR)试剂盒biao准品稀蕋ou椒ㄍ祭haiㄒ狱/span>500μL/管为例,也kegenju实际用量来稀释,如200μL/管)

            

1. 在各孔中加入biao准品或样品各100μL 37℃孵育90穤hong尹/span>

2. 加入100μ生物su化工作襤ai?/span>37℃孵育60穤hong尹/span>

3. 洗涤3

4. 加入100μLmei结合物工作襤ai?/span> 37℃孵育30穤hong尹/span>

5. 洗涤5

6. 加入90μL底物溶襤ai?/span> 37℃孵育15穤hong幼笥腰/span>

7. 加入50μL终止襤ai⒓丛冱/span>450nmbo长处测量OD

8. 结果计算

一、操作yinsu对ELISA结果的影xiangELISA操作步骤fu杂,操作瞙uai苯餵iao大的误差。以下叙shu各ge步骤中的影xiangyinsu。

1.加样

2.wen育

3.洗涤

4.显色

5.比色

二、粂i纳柚胻ong常情况下,ELISA定性实yan以“阳性”和“阴性”来bao告结果,两者间有一条分界线被称为“阳性判断值”(cut-off valueCO值),这shi定性**测定结果bao告的依ju。

三、biao本fuchaELISA手工jian测guo程fu杂,影xiangyinsujiao多,即使室内质控在控,也ke能yin孔间差yi而zao成结果的差yi,yinci加大fucha力度shi保证结果譲i沸缘膋ekao方法,比如对HBsAgHBeAgHCV-AbHIV-AbTP-Ab等项目的ke疑、弱阳衴uan瓯緅i少见模式的jian测结果jin行fucha。

四、结果判断和bao告常用下列几zhong方法表shi结果:

1.定性测定

2.半定量测定 结果一ban以滴度表shi。

3.定量测定 即用已zhi量的biao准品作一系列稀释后jin行ELISA测定,huizhibiao准曲线,结果以you良量或dan位表shi。在ELISA定量jian测中mei一块反ying板都bi须huizhi相ying的biao准曲线。

注意事项:

仔细阅秎iao得魇椤Ⅻ/span>

jiancha试剂盒biao签上的有xiao期。如果超guo有xiao期,请勿使用。

按shuo明书确定所有试剂齐quan(数量、体积)。

biao本zhibei要gui范,meifenbiao本体积要按2-3gefu孔以上的量zhibei(贮存),尽量分譩ai鯾eifen。duan期内无法实yan者,注意低wen保存。

准bei好所有实yan额wai所xu物品,(比如移液器,试管,清洗器,meibiaoyi)。

按shuo明书将所用试剂平衡至室wen,genjujian测biao本数量确定所xu试剂的量。

jiancha试剂盒内meizhong试剂的贮存条件,保证所有试剂均按照试剂盒内shuo明书tuijian的条件存储。

jiancha不稳定或者变质的试剂溶襤aiū热鏲hen淀或变色)。有些试剂,比如biao准品稀释液或者jian测稀释襤ai琸e能在设计时就含有chen淀物。所有试剂在滴入meibiao板之前,bixuchong分混匀。而由于chen淀物的特性,在加入meibiao板之前,bixu不停jiaoban。

保证chong分的孵育时间和wen度。

莤ing鹗褂貌籺ong生产批号的试剂取代蟴hong惺约粱蚧旌舷zhong惺约痢Ⅻ/span>

在混合或溶解蛋bai溶液时,避mian泡沫产生。

在实yan开始之前,安pai好实yan流程。

在实yan开始之前,清洁工作台。

若觴ing侍猓瑈ing与我gong司或代理商的技术支持联系

瘦su受体(LEPR)试剂盒结果判断:

1. meigebiao准品的OD值减去空bai孔的OD值后作图,如设謒ei纯祝騳ing取其平均值计算。襶uan曜计返呐ǘ任醶uobiao,OD值为纵zuobiao,huichubiao准曲线。亦ke以OD值为横zuobiao,biao准品的浓度为纵zuobiao,huichubiao准曲线。

2. tuijian使用zhuan业的曲线zhi作软件,如curve expert 1.31.4,在软件界面jikegenju样品OD值,由biao准曲线chachu相ying的浓度,乘以稀释倍数;亦ke将样品的OD值代入biao准曲线的ni合方程式,计算chu样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。

3. 若样品OD值高于biao准曲线上限,ying适当稀释后zhong测,计算浓度时ying乘以稀释倍数。 

瘦su受体(LEPR)试剂盒有xiao期稳定性考察

本试yan以瘦su受体(LEPR)为例

1.  OD值:

正常保存条件下有xiao期内和超guo有xiao期2ge月所测OD值比jiao

正常有xiao期内OD值: 3.2512.8452.126, 1.859, 1.463, 1.022, 0.710, 0.08

超guo2ge月有xiao期OD值:3.1.7, 2.643, 2.125, 1.796, 1.453, 0.876, 0.432, 0.07

2.回收率:分别于定值血清ji血浆中加入襤uan康命/span>瘦su受体(LEPR)biao准品,zhongfu测定并计算其品均值,回收率为测定值与理lun值的比率。

        正常保存条件下有xiao期内和guo有xiao期2ge月elisa 试剂盒回收率jian测结果

Sample

Conditions

Recovery range(%)

Average(%)

Serum(n=6)

normal

88-106

95

After 12 month

80-100

87

EDTA plasma(n=6)

normal

88-106

97

After 12 month

78-98

87

3. 线性:分别于定值血清ji血浆中加入襤uan康命/span>瘦su受体(LEPR)biao准品,并将biao本按1:2,1:4,1:8稀释,线性范围即为稀释后样本中瘦su受体(LEPR)含量的测定值与理lun值的比率。

         正常保存条件下有xiao期内和guo有xiao期2ge月elisa 试剂盒回线性jian测结果

Sample

Conditions

1:2

1:4

1:8

Serum(n=6)

normal

81-92%

85-90%

89-105%

After 12month

80-88%

82-87%

87-101%

EDTA plasma(n=6)

normal

93-104%

81-97%

91-96%

After 12month

82-95%

75-82%

74-90%

4.  精mi度:以样品测定值的变yi系数CV表shi。CV%=SD/meanx100

批内差:取tong一批次试剂盒对低值,中值和高值样本jin行定量jian测,meifen样本测定20次,分别计算不tong浓度样本的平均值和SD值。

批间差:选取 3 ge不tong批次的试剂盒分别对低、中、高值定值样本jin行定量测定, meige样本使用tong一试剂盒zhongfu测定 8 次,分别计算不tong浓度样本的平均值ji SD 值。(批内差: CV<10%;批间差: CV<11%)

       正常保存条件下有xiao期内和guo有xiao期2ge月elisa 试剂盒回精mi度jian测结果

                    Intra-assay precision

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

16.68

14.22

70.25

62.36

369.75

327.88

SD

1.08

1.25

4.21

5.31

24.69

32.87

CV(%)

6.5

8.8

6.0

8.5

6.6

10

  

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

Sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

18.72

13.68

65.98

61.25

387.22

425.26

SD

1.45

1.52

4.83

5.18

28.49

36.87

CV%

7.7

11.1

7.3

8.5

7.3

8.7

瘦su受体(LEPR)试剂盒会chu现的问题ji解决办法:

1. 加入反ying终止液后,没觴ing庵祷蛭庵灯汀Ⅻ/span>

a.原yin:未加入meibiao记物。

解决办法:请按照操作步骤jin行。

b.原yin:试剂盒内rong物未能chong分回。

解决办法:确定试剂盒内rong物回wen后再jin行操作。

c.原yin:室wen太低。

解决办法:若室wen太低(<19),请于操作步骤4,适当延长wen育时间。

d.原yin:未使用试剂盒的清洗液清洗。

解决办法: 请用试剂盒内所提供的清洗液清洗。

e.原yin:试剂盒已guo有xiao期限。

解决办法:请更换成仍在有xiao期限内的试剂盒。

2. biao准曲线线性不jia,或shi平行性不好。

a.原yin:wen育位置避光不好或受到气流干扰。

解决办法: 请确认wen育位置ji不透光也不透feng(如抽ti内)

b.原yin:操作时间拖太jiu。

解决办法:请在方法熟练后再jin行操作。

c.原yin:wei孔间相互污染。

解决办法: 加样品时,请小心勿溅chuwei孔wai,以mianzao成其它wei孔的污染。

d.原yin:biao准品或meibiao记物所加入的量不一謑ongⅫ/span>

解决办法:请使用已xiao正guo的移液枪,并确保其与吸tou之间有高度mi合性。

e.原yin:添加样品或试剂的操作方法不正确。

解决办法:加样品或试剂时,吸tou请勿接触wei孔。

f.原yin:洗板guo程发生问题(如管lu堵sai、洗wan板后未立刻jin行下一步骤)

解决办法:请随时监控洗板机洗板guo程,洗wan后立即jin行下一步骤。

3. 吸光值均偏高(或线性不筯uan伏/span>)

a.原yin:室wen太高(>25)

解决办法: 若无法降低室内wen度,请适当缩duan步骤4的wen育时间。

b.原yin:底物溶液受到污染。

解决办法: 若发现底物溶液已呈现淡蓝色,请不要再使用。

c.原yin:反ying时间超guo太jiu。

解决办法:请控zhi反ying时间。

d.原yin:meibiao记物污染liao盒内其它试剂。

解决办法:使用guo的吸touying立即丢弃,ke避mian试剂间相互污染,凡shi试剂(特别shimeibiao记物与底物溶液)接触guo的rong器ying立即清洗干净。(xian以漂bai水浸泡,再以清水冲洗干净,ke确保无残留)

4. 阴衴uan曜计返奈庵档陀谘粜yuan曜计返奈庵怠Ⅻ/span>

a.原yin:wei孔中的试剂未能chong分混合。

解决办法: 试剂加wan后,xu轻敲盘四zhou使其chong分混合均匀。

b.原yin:洗板guo程发生问题(tong2-f.)

解决办法:请参考2-f.

c.原yin:添加样品或meibiao记物的量不一謑ongⅫ/span>

解决办法: 请参考2-d.

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