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人V-Fos-FBJgu肉瘤病du癌基因tong源物(FOS)试ji盒 制bei流程

如果您dui该感兴qu的话,ke以
名称: 人V-Fos-FBJgu肉瘤病du癌基因tong源物(FOS)试ji盒 制bei流程
型号: FOS
展shang: ELISA试ji盒
文dang: 无相关文dang

简单介绍

人V-Fos-FBJgu肉瘤病du癌基因tong源物(FOS)试ji盒 制bei流程采用双jia心ELISA法。用kang人FOS包被于酶标板上,shi验时样品或标准品中的人FOS与包被结合,游li的成分被洗qu。襩ai渭尤肷飐u化的kang人FOS和纀ei齳ang化物酶标记的亲和su。kang人FOS与结合zai包被上的人FOS结簒i⑸飐u与亲和su特yi性结合而xing成**复合物,游li的成分被洗qu。加入显se底物(TMB),TMBzai纀ei齳ang化物酶的催化下呈现蓝se,加终止yehou变成huangse。用酶标仪zai450nm波长chuceOD值,人V-Fos-FBJgu肉瘤病du癌基因tong源物(FOS)试ji盒浓度与OD450值之间硈hou龋ü嬷票曜记鷛ian计算出样品中人FOS的浓度。


人V-Fos-FBJgu肉瘤病du癌基因tong源物(FOS)试ji盒 制bei流程  的详细介绍


人V-Fos-FBJgu肉瘤病du癌基因tong源物(FOS)试ji盒 制bei流程

使用说明书

V-Fos-FBJgu肉瘤病du癌基因tong源物(FOS)试ji盒基本yuan理:

本试ji盒采用双jia心ELISA法。用kang人FOS包被于酶标板上,shi验时样品或标准品中的人FOS与包被结合,游li的成分被洗qu。襩ai渭尤肷飐u化的kang人FOS和纀ei齳ang化物酶标记的亲和su。kang人FOS与结合zai包被上的人FOS结簒i⑸飐u与亲和su特yi性结合而xing成**复合物,游li的成分被洗qu。加入显se底物(TMB),TMBzai纀ei齳ang化物酶的催化下呈现蓝se,加终止yehou变成huangse。用酶标仪zai450nm波长chuceOD值,人FOS浓度与OD450值之间硈hou龋ü嬷票曜记鷛ian计算出样品中人FOS的浓度。

V-Fos-FBJgu肉瘤病du癌基因tong源物(FOS)试ji盒描述:

ying文名称 Human V-Fos FBJ Murine Osteosarcoma Viral Oncogene Homolog (FOS) ELISA Kit
謝ing拿劈/span> 人V-Fos-FBJgu肉瘤病du癌基因tong源物(FOS)酶联**吸附ceding试ji盒
货号 E-EL-H0695c zhong属 Human/人
规格 96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)
检ce方法 双jia心法
检cefan围 0.156~10ng/mL 灵min度 0.094ng/mL

人V-Fos-FBJgu肉瘤病du癌基因tong源物(FOS)试ji盒 制bei流程zu成:

謝ing拿劈/span>

ying文名称

规格

保存

  ELISA酶标板(ke拆xie)

  Micro ELISA  Plate(Dismountable)

  8×12 / 8×6*

4/-20 #

冻gan标准品

Reference Standard

  2/1 zhi*

4/-20 #

标准品&样品xi释ye

Reference Standard & Sample Diluent

  1 20mL/12mL*

4

浓缩生物su化

Concentrated Biotinylated Detection Ab

  1zhi 120μL/70μL*

4/-20 #

生物su化xi释ye

Biotinytated Detection Ab Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩HRP酶结合物

Concentrated HRP Conjugate

  1zhi 120μL/70μL*

4(避guang)

酶结合物xi释ye

HRP Conjugate Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩洗涤ye(25×

ConcentratedWashBuffer (25×)

  1 30mL/16mL*

4

底物溶ye(TMB

Substrate Reagent

  1 10mL/6mL*

4(避guang)

反应终止ye

Stop Solution

  1 10mL/6mL*

4

封板覆膜

Plate Sealer

  5/3 *

 

说明书

Product  Description

  1 

 

质检报告

Certificate of Analysis

  1 

 

特别说明
*: [96T/48T](da开包装hou请及时检查suo觴ing锲肥欠衿雚uan完整)
#: 一周内使觤ei纱嬗冱/span>4℃,需长时间存放或多次使用建议存于-20.                                      

V-Fos-FBJgu肉瘤病du癌基因tong源物(FOS)试ji盒检ce前准bei工zuo:

1. 请提前20穤hong哟觔ing箱中取出试ji簒iao絟eng至室温。

2. 将浓缩洗涤ye用双蒸水xi释(1:25)。未用完的放回4℃。从bing箱中取出的浓缩洗涤yeke能you结晶,属于正常现xiang,ke用40℃水yuwei加re使结晶完quan溶解hou再配制洗涤ye(加re温度bu要超过50℃,使用时洗涤ye应为室温)。当日使用。

3. 标准品10000×gli心1穤hong樱尤氡曜计饵/span>&样品xi释ye1.0mL至冻gan标准品謝iao艄芨牵仓曼/span>10穤hong樱舷碌叩故危涑浞秩芙鈎ou,用移ye器将其轻轻混匀(浓度为8000pg/mL)。然hou根据需要进行bei比xi蕋ingㄗⅲ篵u要直接zai反应kong中进行bei比xi蕋ing=ㄒ榕渲瞥梢韵屡ǘ龋篴n照xi释方法图例 标准品&样品xi释ye直接zuo为空白kong0ng/mL。如配制5ng/mL标准品:取0.5mL10ng/mL的上述标准品加入含you0.5mL标准品&样品xi释ye的EP管謝iao煸萰ike,其余浓度襩ai薼ei推。 

4. 生物su化工zuoye:shi验前计算当次shi验suo需用量(以100μL/kong计),shiji配制时应多配制100-200μL。使用前15穤hong樱陨飐u化xi释yexi释浓缩生物su化(1:100)成工zuo浓度。当日使用。

5. 酶结合物工zuoye:shi验前计算当次shi验suo需用量(以100μL/kong计),shiji配制时应多配制100-200μL。使用前15穤hong樱悦附岷衔飜i释yexi释浓缩HRP酶结合物(1:100)成工zuo浓度。

当日使用。

V-Fos-FBJgu肉瘤病du癌基因tong源物(FOS)试ji盒标准品xi释方法图例aiㄒ狱/span>500μL/管为例,也ke根据shiji用量laixi蕋ing纥/span>200μL/管)

            

1. zai各kong中加入标准品或样品各100μL 37℃孵育90穤hong尹/span>

2. 加入100μ生物su化工zuoye,37℃孵育60穤hong尹/span>

3. 洗涤3

4. 加入100μL酶结合物工zuoye, 37℃孵育30穤hong尹/span>

5. 洗涤5

6. 加入90μL底物溶ye, 37℃孵育15穤hong幼笥腰/span>

7. 加入50μL终止ye,立jizai450nm波长chuce量OD

8. 结果计算

一、操zuo因suduiELISA结果的影xiangELISA操zuo步骤复杂,操zuobu当将yin起较大的wu差。以下xu述各ge步骤中的影xiang因su。

1.加样

2.温育

3.洗涤

4.显se

5.比se

二、灰区的设置通常情况下,ELISAding性shi验襶u把粜yu焙汀耙跣yu眑ai报告结果,两者间you一tiao分jiexian被称为“阳性舩ie现怠保?/span>cut-off valueCO值),这是ding性**ceding结果报告的依据。

三、标本复查ELISA手工检ce过程复杂,影xiang因su较多,ji使室内质控zai控,也ke能因kong间差yi而造成结果的差yi,因此加大复查li度是保证结果准确性的ke靠方法,眗e鏳uiHBsAgHBeAgHCV-AbHIV-AbTP-Ab等项目的ke疑、弱阳衴uan瓯炯吧偌J降募靋e结果进行复查。

四、结果舩ie虾捅ǜ娉S孟铝屑钢zhi椒ū韘hi结果:

1.ding性ceding

2.banding量ceding 结果一般以滴度表shi。

3.ding量ceding ji用已知量的标准品zuo一系列xi释hou进行ELISAceding,绘制标准曲xian,结果以优羓i炕虻ノ槐韘hi。zaiELISAding量检ce中mei一块反应板都必xu绘制相应的标准曲xian。

注意事项:

zi细阅读说明书。

检查试ji盒标签上的you效期。如果超过you效期,请勿使用。

an说明书确dingsuoyou试ji齐quan(数量、体积)。

标本制bei要规fan,mei份标本体积要an2-3ge复kong以上的量制bei(贮存),尽量穤hong白鯾ei份。短期内无法shi验者,注意低温保存。

准beihaosuoyoushi验e外suo需物品,(眗e缫苰e器,试管,清洗器,酶标仪)。

an说明书将suo用试ji平heng至室温,根据检ce标本数量确dingsuo需试ji的量。

检查试ji盒内meizhong试ji的贮存tiao件,保证suoyou试ji均an照试ji盒内说明书推荐的tiao件存储。

检查bu稳ding或者变謘hi氖詊i溶ye(眗e鏲hendian或变se)。youxie试ji,眗e绫曜计穢i释ye或者检cexi释ye,ke能zai设计时就含youchendian物。suoyou试jizai滴入酶标板之前,必需充分混匀。而由于chendian物的特性,zai加入酶标板之前,必需buting搅拌。

保证充分的孵育时间和温度。

莤ing鹗褂胋utong生产批号的试ji取代现you试ji或混合现you试ji。

zai混合或溶解蛋白溶ye时,避mian泡mo产生。

zaishi验开始之前,癱ai舎aoshi验流程。

zaishi验开始之前,清洁工zuo台。

若觴ing侍猓τ胛夜净虼韘hang的糺i鮶hi持联系

V-Fos-FBJgu肉瘤病du癌基因tong源物(FOS)试ji盒结果舩ie吸/span>:

1. meige标准品的OD值减qu空白kong的OD值houzuo图,如设置复kong,则应取其平均值计算。襶uan曜计返呐ǘ任醶uo标,OD值为zongzuo标,绘出标准曲xian。亦ke以OD值为横zuo标,标准品的浓度为zongzuo标,绘出标准曲xian。

2. 推荐使用专襠ang那鷛ian制zuo软件,如curve expert 1.31.4,zai软件jiemian既ke根据样品OD值,由标准曲xian查出相应的浓度,cheng以xi释bei数;亦ke将样品的OD值代入标准曲xian的ni合方程式,计算出样品浓度,再cheng以xi释bei数,ji为样品的shiji浓度。

3. 若样品OD值gao于标准曲xian上xian,应蕇hi眡i释hou重ce,计算浓度时应cheng以xi释bei数。 

V-Fos-FBJgu肉瘤病du癌基因tong源物(FOS)试ji盒you效期稳ding性考察

本试验以V-Fos-FBJgu肉瘤病du癌基因tong源物(FOS)为例

1.  OD值:

正常保存tiao件下you效期内和超过you效期2ge月suoceOD值比较

正常you效期内OD值: 3.2512.8452.126, 1.859, 1.463, 1.022, 0.710, 0.08

超过2ge月you效期OD值:3.1.7, 2.643, 2.125, 1.796, 1.453, 0.876, 0.432, 0.07

2.回shoulv:分别于ding值血清及血浆中加入襤uan康命/span>V-Fos-FBJgu肉瘤病du癌基因tong源物(FOS)标准品,重复ceding并计算其品均值,回shoulv为ceding值与理论謉ang谋萳v。

        正常保存tiao件下you效期内和过you效期2ge月elisa 试ji盒回shoulv检ce结果

Sample

Conditions

Recovery range(%)

Average(%)

Serum(n=6)

normal

88-106

95

After 12 month

80-100

87

EDTA plasma(n=6)

normal

88-106

97

After 12 month

78-98

87

3. xian性:分别于ding值血清及血浆中加入襤uan康命/span>V-Fos-FBJgu肉瘤病du癌基因tong源物(FOS)标准品,并将标本an1:2,1:4,1:8xi蕋ing瑇ian性fan围ji为xi释hou样本中V-Fos-FBJgu肉瘤病du癌基因tong源物(FOS)含量的ceding值与理论謉ang谋萳v。

         正常保存tiao件下you效期内和过you效期2ge月elisa 试ji盒回xian性检ce结果

Sample

Conditions

1:2

1:4

1:8

Serum(n=6)

normal

81-92%

85-90%

89-105%

After 12month

80-88%

82-87%

87-101%

EDTA plasma(n=6)

normal

93-104%

81-97%

91-96%

After 12month

82-95%

75-82%

74-90%

4.  精密度:以样品ceding謉ang谋鋣i系数CV表shi。CV%=SD/meanx100

批内差:取tong一批次试ji簒ie缘椭担兄岛蚲ao值样本进衳ie考靋e,mei份样本ceding20次,分别计算butong浓度样本的平均值和SD值。

批间差:选取 3 gebutong批次的试ji盒分别dui低、中、gao值ding值样本进衳ie縞eding, meige样本使用tong一试ji盒重复ceding 8 次,分别计算butong浓度样本的平均值及 SD 值。(批内差: CV<10%;批间差: CV<11%)

       正常保存tiao件下you效期内和过you效期2ge月elisa 试ji盒回精密度检ce结果

                    Intra-assay precision

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

16.68

14.22

70.25

62.36

369.75

327.88

SD

1.08

1.25

4.21

5.31

24.69

32.87

CV(%)

6.5

8.8

6.0

8.5

6.6

10

  

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

Sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

18.72

13.68

65.98

61.25

387.22

425.26

SD

1.45

1.52

4.83

5.18

28.49

36.87

CV%

7.7

11.1

7.3

8.5

7.3

8.7

V-Fos-FBJgu肉瘤病du癌基因tong源物(FOS)试ji盒hui出现的问题及解决办法:

1. 加入反应终止yehou,没觴ing黦uang值或吸guang值偏低。

a.yuan因:未加入酶标记物。

解决办法:请an照操zuo步骤进行。

b.yuan因:试ji盒内容物未能充分回。

解决办法:确ding试ji盒内容物回温hou再进行操zuo。

c.yuan因:室温太低。

解决办法:若室温太低(<19),请于操zuo步骤4,蕇hi毖映の掠奔洹Ⅻ/span>

d.yuan因:未使用试ji盒的清洗ye清洗。

解决办法: 请用试ji盒内suo提供的清洗ye清洗。

e.yuan因:试ji盒已过you效期xian。

解决办法:请geng换成rengzaiyou效期xian内的试ji盒。

2. 标准曲xianxian性bu佳,或是平行性buhao。

a.yuan因:温育位置避guangbuhao或受到气流gan扰。

解决办法: 请确认温育位置既bu透guang也bu透风(如抽屉内)

b.yuan因:操zuo时间拖太久。

解决办法:请zai方法shulianhou再进行操zuo。

c.yuan因:weikong间相互wu染。

解决办法: 加样品时,请小心勿溅出weikong外,以mian造成其它weikong的wu染。

d.yuan因:标准品或酶标记物suo加入的量bu一致。

解决办法:请使用已xiao正过的移ye枪,并确保其与吸头之间yougao度密合衴uⅫ/span>

e.yuan因:添加样品或试ji的操zuo方法bu正确。

解决办法:加样品或试ji时,吸头请勿接触weikong。

f.yuan因:洗板过程fa生问题(如管耭an氯⑾赐臧録ou未立刻进行下一步骤)

解决办法:请随时监控洗板机洗板过程,洗完hou立ji进行下一步骤。

3. 吸guang值均偏gao(或xian性bu筯uan伏/span>)

a.yuan因:室温太gao(>25)

解决办法: 若无法絛ang褪夷谖露龋胧shi彼醵滩街琰/span>4的温育时间。

b.yuan因:底物溶ye受到wu染。

解决办法: 若fa现底物溶ye已呈现淡蓝se,请bu要再使用。

c.yuan因:反应时间超过太久。

解决办法:请控制反应时间。

d.yuan因ao副昙俏飛u染了盒内其它试ji。

解决办法:使用过的吸头应立ji丢qi,ke避mian试ji间相互wu染,凡是试ji(特别是酶标记物与底物溶ye)接触过的容器应立ji清洗gan净。(xian以漂白水浸泡,再以清水冲洗gan净,ke确保无残留)

4. 阴衴uan曜计返奈黦uang謉ang陀谘粜yuan曜计返奈黦uang值。

a.yuan因:weikong中的试ji未能充分混簒iⅫ/span>

解决办法: 试ji加完hou,需轻敲盘四周使其充分混合均匀。

b.yuan因:洗板过程fa生问题(tong2-f.)

解决办法:请参考2-f.

c.yuan因:添加样品或酶标记物的量bu一致。

解决办法: 请参考2-d.

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