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人肿liu坏死因子配体chao家zu成员14(TNFSF14)试剂盒

如果您对该感xing趣的话,可以
名称: 人肿liu坏死因子配体chao家zu成员14(TNFSF14)试剂盒
型号: TNFSF14
zhan商: ELISA试剂盒
文dang: wu相关文dang

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人肿liu坏死因子配体chao家zu成员14(TNFSF14)试剂盒  的详蟜u閟hao


肿liu坏死因子配体chao家zu成员14(TNFSF14)试剂盒

使用说明书

肿liu坏死因子配体chao家zu成员14(TNFSF14)试剂盒基本yuan理:

本试剂盒cai用双夹心ELISAfa。用抗人TNFSF14包被于酶biao板上,实验时样品或biao譲i分械娜薚NFSF14与包被结合,游li的成分被xiqu。yi次加入生物素化的抗人TNFSF14和辣根过氧化物酶biao记的亲和素。抗人TNFSF14与结簒ian诎簧系娜薚NFSF14结合、生物素与亲和素te异性结合而形成**复合物,游li的成分被xiqu。加入xian色底物(TMB),TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现lan色,加终zhi液后变成黄色。用酶biao仪在450nm波长处测OD值,人TNFSF14浓度与OD450值之jian呈正比,通过绘制biao准qu线ji算出样品中人TNFSF14的浓度。

肿liu坏死因子配体chao家zu成员14(TNFSF14)试剂盒描述:

英文名称 Human TNFSF14 (Tumor Necrosis Factor Ligand Superfamily, Member 14)ELISA Kit
中文名称 人肿liu坏死因子配体chao家zu成员14(TNFSF14)酶联**吸fu测定试剂盒
货号 X-EL-H0095c 种属 Human/人
规格 96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)
检测fangfa 双夹心fa
检测范围 31.25~2000pg/mL 灵敏度 18.75pg/mL

试剂盒组成:

中文名称

英文名称

规格

保存

  ELISA酶biao板(可chai卸)

  Micro ELISA  Plate(Dismountable)

  8×12 / 8×6*

4/-20 #

冻干biao譲i饵/span>

Reference Standard

  2/1 *

4/-20 #

biao譲i饵/span>&样品稀shi液

Reference Standard & Sample Diluent

  1 20mL/12mL*

4

浓suo生物素化

Concentrated Biotinylated Detection Ab

  1 120μL/70μL*

4/-20 #

生物素化稀shi液

Biotinytated Detection Ab Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓suoHRP胒u岷衔铧/span>

Concentrated HRP Conjugate

  1 120μL/70μL*

4(避guang)

胒u岷衔锵hi液

HRP Conjugate Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓suoxidi液(25×

ConcentratedWashBuffer (25×)

  1 30mL/16mL*

4

底物溶液(TMB

Substrate Reagent

  1 10mL/6mL*

4(避guang)

fan应终zhi液

Stop Solution

  1 10mL/6mL*

4

封板覆膜

Plate Sealer

  5/3 *

 

说明书

Product  Description

  1 

 

质检报告

Certificate of Analysis

  1 

 

tebie说明
*: [96T/48T](打开包装后请及时检查所有物品是fuqiquan完整)
#: yi周内使用可存于4℃,xu长时jian存放或duo次使用建议存于-20.                                      

肿liu坏死因子配体chao家zu成员14(TNFSF14)试剂盒检测前准备工zuo:

1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂簒iao琾ingheng至室温。

2. 将浓suoxidi液用双蒸水稀shi(1:25)。未用完的放回4℃。从冰箱中取出的浓suoxidi液可能有结晶,属于正常现象,可用40℃水浴微加re使结晶完quan溶解后再配制xidi液(加re温度不要chao过50℃,使用时xidi液应为室温)。当日使用。

3. biao譲i饵/span>10000×gli心1分钟,加入biao譲i饵/span>&样品稀shi液1.0mL至冻干biao譲i分xiao艄芨牵仓曼/span>10分钟,上下dian倒数次,待其充分溶解后,用yi液器将其轻轻混匀(浓度为8000pg/mL)。然后根juxu要jin行倍比稀shi(注:不要直接在fan应kong中jin行倍比稀shi)。建议配制成以下浓度:按照稀shifangfatu例 biao譲i饵/span>&样品稀shi液直接zuo为空白kong0ng/mL。如配制5ng/mLbiao譲i罚喝狘/span>0.5mL10ng/mL的上述biao譲i芳尤牒宵/span>0.5mLbiao譲i饵/span>&样品稀shi液的EP管謝iao煸燃纯桑溆嗯ǘ葃i此类推。 

4. 生物素化工zuo液:实验前ji算当次实验所xu用liang(以100μL/kongji),实际配制时应duo配制100-200μL。使觤en?/span>15分钟,以生物素化稀shi液稀shi浓suo生物素化(1:100)成工zuo浓度。当日使用。

5. 胒u岷衔锕uo液:实验前ji算当次实验所xu用liang(以100μL/kongji),实际配制时应duo配制100-200μL。使觤en?/span>15分钟,以胒u岷衔锵hi液稀shi浓suoHRP胒u岷衔铧/span>(1:100)成工zuo浓度。

当日使用。

肿liu坏死因子配体chao家zu成员14(TNFSF14)试剂盒biao譲i废hifangfatu例:(以500μL/管为例,也可根ju实际用liang来稀shi,如200μL/管)

            

1. 在各kong中加入biao譲i坊蜓犯鳇/span>100μL 37℃fu育90分钟

2. 加入100μ生物素化工zuo液,37℃fu育60分钟

3. xidi3

4. 加入100μL胒u岷衔锕uo液, 37℃fu育30分钟

5. xidi5

6. 加入90μL底物溶液, 37℃fu育15分钟左右

7. 加入50μL终zhi液,立即在450nm波长处测liangOD

8. 结果ji算

yi、操zuo因素对ELISA结果的影xiangELISA操zuo步zhou复杂,操zuo不当将yin起絰i蟮奈蟛睢R韵聏u述各个步zhou中的影xiang因素。

1.加样

2.温育

3.xidi

4.xian色

5.比色

二、灰qu的设置通常qing况下,ELISA定性实验以“阳性”和“yin性”来报告结果,两者jian有yi条分界线被称为“阳性判断值”(cut-off valueCO值),这是定性**测定结果报告的yiju。

三、biao本复查ELISA蕑hiぜ觳夤谈丛樱皒iang因素较duo,即使室内质控在控,也可能因kongjian差异而造成结果的差异,因此加大复查力度是保证结果准确性的可靠fangfa,眗e缍狱/span>HBsAgHBeAgHCV-AbHIV-AbTP-Ab等项目的可疑、ruo阳性biao本及少见模shi的检测结果jin行复查。

si、结果判断和报告常用下列几种fangfa表示结果:

1.定性测定

2.ban定liang测定 结果yi般以滴度表示。

3.定liang测定 即用已zhiliang的biao譲i穤uoyi系列稀shi后jin行ELISA测定,绘制biao准qu线,结果以优liangliang或单位表示。在ELISA定liang检测中每yi块fan应板dubi须绘制相应的biao准qu线。

注意事项:

仔细阅读说明书。

检查试剂盒biaoqian上的有效期。如果chao过有效期,请勿使用。

按说明书确定所有试剂qiquan(数liang、体积)。

biao本制备要规范,每份biao本体积要按2-3个复kong以上的liang制备(zhu存),尽liang分装做备份。duan期内wufa实验者,注意di温保存。

准备hao所有实验额外所xu物品,(眗e鐈i液器,试管,清xi器,酶biao仪)。

按说明书将所用试剂pingheng至室温,根ju检测biao本数liang确定所xu试剂的liang。

检查试剂盒内每种试剂的zhu存条件,保证所有试剂均按照试剂盒内说明书推jian的条件存chu。

检查不稳定或者变质的试剂溶液(眗e绯羋ian或变色)。有些试剂,眗e鏱iao譲i废hi液或者检测稀shi液,可能在设ji时就含有沉dian物。所有试剂在滴入酶biao板之前,bixu充分混匀。而由于沉dian物的te性,在加入酶biao板之前,bixu不停搅拌。

保证充分的fu育时jian和温度。

切勿使用不同生产批号的试剂取dai现有试剂或混合现有试剂。

在混合或溶解蛋白溶液时,避免pao沫产生。

在实验开始之前,安paihao实验流程。

在实验开始之前,清jie工zuo台。

若有问题,应与我公薺ing騞ai理商的技术支持联系

肿liu坏死因子配体chao家zu成员14(TNFSF14)试剂盒结果判断:

1. 每个biao譲i返命/span>OD值减qu空白kong的OD值后zuotu,如设置复kong,ze应取其ping均值ji算。以biao譲i返呐ǘ任嶙鴅iao,OD值为纵坐biao,绘出biao准qu线。yi可以OD值为横坐biao,biao譲i返呐ǘ任葑鴅iao,绘出biao准qu线。

2. 推jian使用专襠ang膓u线制zuoruan件,如curve expert 1.31.4,在ruan件界面既可根ju样品OD值,由biao准qu线查出相应的浓度,乘以稀shi倍数;yi可将样品的OD值dai入biao准qu线的拟合fang程shi,ji算出样品浓度,再乘以稀shi倍数,即为样品的实际浓度。

3. 若样品OD值高于biao准qu线上xian,应shi当稀shi后重测,ji算浓度时应乘以稀shi倍数。 

肿liu坏死因子配体chao家zu成员14(TNFSF14)试剂盒有效期稳定性考察

本试验以肿liu坏死因子配体chao家zu成员14(TNFSF14)为例

1.  OD值:

正常保存条件下有效期内和chao过有效期2个月所测OD值比较

正常有效期内OD值: 3.2512.8452.126, 1.859, 1.463, 1.022, 0.710, 0.08

chao过2个月有效期OD值:3.1.7, 2.643, 2.125, 1.796, 1.453, 0.876, 0.432, 0.07

2.回收lv:分bie于定值xue清及xue浆中加入yi定liang的肿liu坏死因子配体chao家zu成员14(TNFSF14)biao譲i罚馗床舛╞ingji算其品均值,回收lv为测定謉i肜砺壑dang谋萳v。

        正常保存条件下有效期内和过有效期2个月elisa 试剂盒回收lv检测结果

Sample

Conditions

Recovery range(%)

Average(%)

Serum(n=6)

normal

88-106

95

After 12 month

80-100

87

EDTA plasma(n=6)

normal

88-106

97

After 12 month

78-98

87

3. 线性:分bie于定值xue清及xue浆中加入yi定liang的肿liu坏死因子配体chao家zu成员14(TNFSF14)biao譲i罚琤ing将biao本按1:2,1:4,1:8稀shi,线性范围即为稀shi后样本中肿liu坏死因子配体chao家zu成员14(TNFSF14)含liang的测定謉i肜砺壑dang谋萳v。

         正常保存条件下有效期内和过有效期2个月elisa 试剂盒回线性检测结果

Sample

Conditions

1:2

1:4

1:8

Serum(n=6)

normal

81-92%

85-90%

89-105%

After 12month

80-88%

82-87%

87-101%

EDTA plasma(n=6)

normal

93-104%

81-97%

91-96%

After 12month

82-95%

75-82%

74-90%

4.  jing密度:以样苀an舛ㄖdang谋湟煜凳?span>CV表示。CV%=SD/meanx100

批内差:取同yi批次试剂盒对di值,中值簍ou咧笛緅in行定liang检测,每份样本测定20次,分bieji算不同浓度样本的ping均值和SD值。

批jian差:选取 3 个不同批次的试剂盒分bie对di、中、高值定值样本jin行定liang测定, 每个样本使用同yi试剂盒重复测定 8 次,分bieji算不同浓度样本的ping均值及 SD 值。(批内差: CV<10%;批jian差: CV<11%)

       正常保存条件下有效期内和过有效期2个月elisa 试剂盒回jing密度检测结果

                    Intra-assay precision

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

16.68

14.22

70.25

62.36

369.75

327.88

SD

1.08

1.25

4.21

5.31

24.69

32.87

CV(%)

6.5

8.8

6.0

8.5

6.6

10

  

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

Sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

18.72

13.68

65.98

61.25

387.22

425.26

SD

1.45

1.52

4.83

5.18

28.49

36.87

CV%

7.7

11.1

7.3

8.5

7.3

8.7

肿liu坏死因子配体chao家zu成员14(TNFSF14)试剂盒hui出现的问题及解决办fa:

1. 加入fan应终zhi液后,没有吸guang值或吸guang值piandi。

a.yuan因:未加入酶biao记物。

解决办fa:请按照操zuo步zhoujin行。

b.yuan因:试剂盒内容物未能充分回。

解决办fa:确定试剂盒内容物回温后再jin行操zuo。

c.yuan因:室温太di。

解决办fa:若室温太di(<19),请于操zuo步zhou4,shi当延长温育时jian。

d.yuan因:未使用试剂盒的清xi液清xi。

解决办fa: 请用试剂盒内所提gong的清xi液清xi。

e.yuan因:试剂盒已过有效期xian。

解决办fa:请geng换成仍在有效期xian内的试剂盒。

2. biao准qu线线性不佳,或是ping行性不hao。

a.yuan因:温育位置避guang不hao或受dao气流干rao。

解决办fa: 请确认温育位置既不touguang也不tou风(如抽屉内)

b.yuan因:操zuo时jiantuo太久。

解决办fa:请在fangfa熟练后再jin行操zuo。

c.yuan因:微kongjian相互污ran。

解决办fa: 加样品时,请小心勿溅出微kong外,以免造成其它微kong的污ran。

d.yuan因:biao譲i坊蛎竍iao记物所加入的liang不yi致。

解决办fa:请使用已xiao正过的yi液枪,bing确保其与吸头之jian有高度密合性。

e.yuan因:添加样品或试剂的操zuofangfa不正确。

解决办fa:加样品或试剂时,吸头请勿接触微kong。

f.yuan因:xi板过程fa生问题(如管路堵塞、xi完板后未立刻jin行下yi步zhou)

解决办fa:请sui时监控xi板机xi板过程,xi完后立即jin行下yi步zhou。

3. 吸guang值均pian高(或线性不够陡)

a.yuan因:室温太高(>25)

解决办fa: 若wufa降di室内温度,请shi当suoduan步zhou4的温育时jian。

b.yuan因:底物溶液受dao污ran。

解决办fa: 若fa现底物溶液已呈现淡lan色,请不要再使用。

c.yuan因:fan应时jianchao过太久。

解决办fa:请控制fan应时jian。

d.yuan因ao竍iao记物污ran了盒内其它试剂。

解决办fa:使用过的吸头应立即ding弃,可避免试剂jian相互污ran,fan是试剂(tebie是酶biao记物与底物溶液)接触过的容器应立即清xi干jing。(先以piao白水浸pao,再以清水冲xi干jing,可确保wucan留)

4. yin性biao譲i返奈黦uang值di于阳性biao譲i返奈黦uang值。

a.yuan因:微kong中的试剂未能充分混合。

解决办fa: 试糽iang油旰螅瑇u轻敲盘si周使其充分混合均匀。

b.yuan因:xi板过程fa生问题(2-f.)

解决办fa:请参考2-f.

c.yuan因:添加样品或酶biao记物的liang不yi致。

解决办fa: 请参考2-d.

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