资料

ren巨噬细胞集落刺激因子(MCSF)试剂盒

如果nin对gai感兴qu的话,可以
mingchen: ren巨噬细胞集落刺激因子(MCSF)试剂盒
型号: MCSF
zhan商: ELISA试剂盒
文档: wu相关文档

简单介绍

万博体育matext


ren巨噬细胞集落刺激因子(MCSF)试剂盒  的详细介绍


ren巨噬细胞集落刺激因子(MCSF)试剂盒

使用shuo明书

ren巨噬细胞集落刺激因子(MCSF)试剂盒基ben原理:

ben试剂盒采用双夹心ELISA法。用kangrenMCSF包被于酶标板上,实验shi样品或标准品中的renMCSF与包被结合,游离的成分被洗去。依ci加入生物素hua的kangrenMCSF和辣gen过yanghua物酶标记的qin和素。kangrenMCSF与结合在包被蓌i膔enMCSF结合、生物素与qin和素特yi性结合而形成**复合物,游离的成分被洗去。加入显色di物(TMB),TMB在辣gen过yanghua物酶的催hua下呈xian蓝色,加终止ye后bian成黄色。用酶标仪在450nmbochang处测OD值,renMCSF浓度与OD450值zhi间呈zheng比,通过绘制标准曲线计suan出样品中renMCSF的浓度。

ren巨噬细胞集落刺激因子(MCSF)试剂盒描shu:

英文mingchen Human MCSF (Macrophage Colony Stimulating Factor 1) ELISA Kit
中文mingchen ren巨噬细胞集落刺激因子(MCSF)酶联**吸附测定试剂盒
货号 X-EL-H0097c 种属 Human/ren
规格 96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)
检测方法 双夹心法
检测范围 31.25~2000pg/mL 灵min度 18.75pg/mL

试剂盒组成:

中文mingchen

英文mingchen

规格

保存

  ELISA酶标板(可拆卸)

  Micro ELISA  Plate(Dismountable)

  8×12 / 8×6*

4/-20 #

冻干标准品

Reference Standard

  2/1 *

4/-20 #

标准品&样品稀释ye

Reference Standard & Sample Diluent

  1 20mL/12mL*

4

浓缩生物素hua

Concentrated Biotinylated Detection Ab

  1 120μL/70μL*

4/-20 #

生物素hua稀释ye

Biotinytated Detection Ab Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩HRP酶结合物

Concentrated HRP Conjugate

  1 120μL/70μL*

4(避光)

酶结合物稀释ye

HRP Conjugate Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩洗di襤ai?/span>25×

ConcentratedWashBuffer (25×)

  1 30mL/16mL*

4

di物溶襤ai?/span>TMB

Substrate Reagent

  1 10mL/6mL*

4(避光)

fan应终止ye

Stop Solution

  1 10mL/6mL*

4

feng板竎ai|/span>

Plate Sealer

  5/3 *

 

shuo明书

Product  Description

  1 

 

质检baogao

Certificate of Analysis

  1 

 

特别shuo明
*: [96T/48T](打开包zhuang后请jishi检查所you物品是否齐quan完整)
#: yi周内使用可存于4℃,需changshi间存放或多ci使用jian议存于-20.                                      

ren巨噬细胞集落刺激因子(MCSF)试剂盒检测前准备工作:

1. 请提前20分钟从bing箱中取出试剂盒,平衡至室蝜ongⅫ/span>

2. 将浓缩洗diye用双蒸水稀释(1:25)。未用完的放回4℃。从bing箱中取出的浓缩洗diye可nengyou结晶,属于zheng常xianxiang,可用40℃水yu微加热使结晶完quan溶解后再配制洗di襤ai尤任露炔灰?/span>50℃,使用shi洗diye应为室温)。当日使用。

3. 标准品10000×g离心1分钟,加入标准品&样品稀释ye1.0mL至冻干标准品中,旋jin管盖,jing置10分钟,上下颠倒数ci,待其充分溶解后,用yiye器将其轻轻混匀(浓度为8000pg/mL)。然后gen据需要jin行倍比稀释(注:不要直接在fan应孔中jin行倍比稀释)。jian议配制成以下浓度:an照稀蕋ou椒╰u例 标准品&样品稀释ye直接作为kong白孔0ng/mL。如配制5ng/mL标准品:取0.5mL10ng/mL的上shu标准品加入含you0.5mL标准品&样品稀释ye的EP管中,混匀即可,其余浓度依此类tui。 

4. 生物素hua工作襤ai菏笛榍凹苨uan当ci实验所需用量(以100μL/孔计),实ji配制shi应多配制100-200μL。使用前15分钟,以生物素hua稀释ye稀释浓缩生物素hua(1:100)成工作浓度。当日使用。

5. 酶结合物工作襤ai菏笛榍凹苨uan当ci实验所需用量(以100μL/孔计),实ji配制shi应多配制100-200μL。使用前15分钟,以酶结合物稀释ye稀释浓缩HRP酶结合物(1:100)成工作浓度。

当日使用。

ren巨噬细胞集落刺激因子(MCSF)试剂盒标准品稀蕋ou椒╰u例aiㄒ狱/span>500μL/管为例,也可gen据实ji用量来稀释,如200μL/管)

            

1. 在ge孔中加入标准品或样品ge100μL 37℃孵育90分钟

2. 加入100μ生物素hua工作襤ai?/span>37℃孵育60分钟

3. 洗di3ci

4. 加入100μL酶结合物工作襤ai?/span> 37℃孵育30分钟

5. 洗di5ci

6. 加入90μLdi物溶襤ai?/span> 37℃孵育15分钟左右

7. 加入50μL终止襤ai⒓丛冱/span>450nmbochang处测量OD

8. 结果计suan

yi、操作因素对ELISA结果的ying响ELISA操作步骤复杂,操作不当将yin起较大的误cha。以下xushuge个步骤中的ying响因素。

1.加样

2.温育

3.洗di

4.显色

5.比色

二、灰区的设置通常情况下,ELISA定性实验襶u把粜yu焙汀耙跣yu崩碽aogao结果,两者间youyi条分界线被chen为“阳性判秞ian怠保?/span>cut-off valueCO值),这是定性**测定结果baogao的依据。

三、标ben复查ELISAshou工检测过cheng复杂,ying响因素较多,即使室内质kong在kong,也可neng因孔间chayi而造成结果的chayi,因此加大复查力度是保证结果譲i沸缘目煽糠椒ǎ热缍狱/span>HBsAgHBeAgHCV-AbHIV-AbTP-Ab等项目的可疑、弱阳衴uan阞enji少见模式的检测结果jin行复查。

四、结果判断和baogao常用下列几謟hi椒ū硎窘峁裹/span>

1.定性测定

2.半定量测定 结果yi般以滴度表示。

3.定量测定 即用已知量的标准品作yixi列稀释后jin行ELISA测定,绘制标准曲线,结果以优良量或单wei表示。在ELISA定量检测中每yi块fan应板都必须绘制相应的标准曲线。

注意事项:

仔细阅读shuo明书。

检查试剂盒标签蓌i膟ou效期。如果超过you效期,请勿使用。

anshuo明书确定所you试剂齐quan(数量、体积)。

标ben制备要规范,每份标ben体积要an2-3个复孔以蓌i牧恐票福ㄖ妫×糠謟huang做备份。短期内wu法实验者,注意低温保存。

准备好所you实验额外所需物品,(比如yiye器,试管,qing洗器,酶标仪)。

anshuo明书将所用试剂平衡至室温,gen据检测标ben数量确定所需试剂的量。

检查试剂盒内每种试剂的贮存条件,保证所you试剂均an照试剂盒内shuo明书tui荐的条件存储。

检查不稳定或者bian质的试剂溶襤aiū热绯羋ian或bian色)。youxie试剂,比如标准品稀释ye或者检测稀释襤ai蒼eng在设计蔮en秃瑈ou沉dian物。所you试剂在滴入酶标板zhi前,必需充分混匀。而由于沉dian物的特性,在加入酶标板zhi前,必需不停搅拌。

保证充分的孵育shi间和温度。

切勿使用不同生产批号的试剂取daixianyou试剂或混合xianyou试剂。

在混合或溶解dan白溶yeshi,避免泡沫产生。

在实验开始zhi前,安排好实验liucheng。

在实验开始zhi前,qing洁工作台。

若you问题,应与wogong薺ing騞ai理商的糺i踔hi联xi

ren巨噬细胞集落刺激因子(MCSF)试剂盒结果判断:

1. 每个标准品的OD值减去kong白孔的OD值后作tu,如设置复孔,则应取其平均值计suan。襶uan曜计返呐ǘ任猦eng坐标,OD值为纵坐标,绘出标准曲线。亦可以OD值为heng坐标,标准品的浓度为纵坐标,绘出标准曲线。

2. tui荐使用专业的曲线制作软件,如curve expert 1.31.4,在软件界面ji可gen据样品OD值,由标准曲线查出相应的浓度,乘以稀释倍数;亦可将样品的OD值dai入标准曲线的拟合方cheng式,计suan出样品浓度,再乘以稀释倍数,糲i返氖礿i浓度。

3. 若样品OD值高于标准曲线上限,应适当稀释后重测,计suan浓度shi应乘以稀释倍数。 

ren巨噬细胞集落刺激因子(MCSF)试剂盒you效期稳定性考察

ben试验以巨噬细胞集落刺激因子(MCSF)为例

1.  OD值:

zheng常保存条件下you效期内和超过you效期2个yue所测OD值比较

zheng常you效期内OD值: 3.2512.8452.126, 1.859, 1.463, 1.022, 0.710, 0.08

超过2个yueyou效期OD值:3.1.7, 2.643, 2.125, 1.796, 1.453, 0.876, 0.432, 0.07

2.回shou率:分别于定值血qingji血浆中加入yi定量的巨噬细胞集落刺激因子(MCSF)标准品,重复测定并计suan其品均值,回shou率为测定謉i肜砺壑档谋嚷省Ⅻ/span>

        zheng常保存条件下you效期内和过you效期2个yueelisa 试剂盒回shou率检测结果

Sample

Conditions

Recovery range(%)

Average(%)

Serum(n=6)

normal

88-106

95

After 12 month

80-100

87

EDTA plasma(n=6)

normal

88-106

97

After 12 month

78-98

87

3. 线性:分别于定值血qingji血浆中加入yi定量的巨噬细胞集落刺激因子(MCSF)标准品,并将标benan1:2,1:4,1:8稀释,线性范围糲i∈秃笱鵥en中巨噬细胞集落刺激因子(MCSF)含量的测定謉i肜砺壑档谋嚷省Ⅻ/span>

         zheng常保存条件下you效期内和过you效期2个yueelisa 试剂盒回线性检测结果

Sample

Conditions

1:2

1:4

1:8

Serum(n=6)

normal

81-92%

85-90%

89-105%

After 12month

80-88%

82-87%

87-101%

EDTA plasma(n=6)

normal

93-104%

81-97%

91-96%

After 12month

82-95%

75-82%

74-90%

4.  jing密度:以样品测定值的bianyixi数CV表示。CV%=SD/meanx100

批内cha:取同yi批ci试剂盒对低值,中值和高值样benjin行定量检测,每份样ben测定20ci,分别计suan不同浓度样ben的平均值和SD值。

批间cha:选取 3 个不同批ci的试剂盒分别对低、中、高值定值样benjin行定量测定, 每个样ben使用同yi试剂盒重复测定 8 ci,分别计suan不同浓度样ben的平均值ji SD 值。(批内cha: CV<10%;批间cha: CV<11%)

       zheng常保存条件下you效期内和过you效期2个yueelisa 试剂盒回jing密度检测结果

                    Intra-assay precision

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

16.68

14.22

70.25

62.36

369.75

327.88

SD

1.08

1.25

4.21

5.31

24.69

32.87

CV(%)

6.5

8.8

6.0

8.5

6.6

10

  

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

Sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

18.72

13.68

65.98

61.25

387.22

425.26

SD

1.45

1.52

4.83

5.18

28.49

36.87

CV%

7.7

11.1

7.3

8.5

7.3

8.7

ren巨噬细胞集落刺激因子(MCSF)试剂盒会出xian的问题ji解jueban法:

1. 加入fan应终止ye后,meiyou吸光值或吸光值偏低。

a.原因:未加入酶标记物。

解jueban法:请an照操作步骤jin行。

b.原因:试剂盒内容物未neng充分回。

解jueban法:确定试剂盒内容物回温后再jin行操作。

c.原因:室温太低。

解jueban法:若室温太低(<19),请于操作步骤4,适当延chang温育shi间。

d.原因:未使用试剂盒的qing洗yeqing洗。

解jueban法: 请用试剂盒内所提供的qing洗yeqing洗。

e.原因:试剂盒已过you效期限。

解jueban法:请更换成reng在you效期限内的试剂盒。

2. 标准曲线线性不佳,或是平行性不好。

a.原因:温育wei置避光不簃ei蚴艿狡鴏iu干扰。

解jueban法: 请确认温育wei置ji不透光也不透风(如抽屉内)

b.原因:操作shi间拖太jiu。

解jueban法:请在方法熟练后再jin行操作。

c.原因:微孔间相互污ran。

解jueban法: 加样品shi,请小心勿溅出微孔外,以免造成其它微孔的污ran。

d.原因:标准品或酶标记物所加入的量不yi謑ongⅫ/span>

解jueban法:请使用已校zheng过的yiye枪,并确保其与吸touzhi间you高度密合衴uⅫ/span>

e.原因:添加样品或试剂的操作方法不zheng确。

解jueban法:加样品或试剂shi,吸tou请勿接触微孔。

f.原因:洗板过chengfa生问题(如管路堵塞、洗完板后未立kejin行下yi步骤)

解jueban法:请随shi监kong洗板机洗板过cheng,洗完后立即jin行下yi步骤。

3. 吸光值均偏高(或线性不够dou)

a.原因:室温太高(>25)

解jueban法: 若wu法降低室内温度,请适当缩短步骤4的温育shi间。

b.原因:di物溶ye受到污ran。

解jueban法: 若faxiandi物溶ye已呈xian淡蓝色,请不要再使用。

c.原因:fan应shi间超过太jiu。

解jueban法:请kong制fan应shi间。

d.原因:酶标记物污ranliao盒内其它试剂。

解jueban法:使用过的吸tou应立即dingqi,可避免试剂间相互污ran,凡是试剂(特别是酶标记物与di物溶ye)接触过的容器应立即qing洗干jing。(先以漂白水浸泡,再以qing水chong洗干jing,可确保wucan留)

4. 阴衴uan曜计返奈庵档陀谘粜yuan曜计返奈庵怠Ⅻ/span>

a.原因:微孔中的试剂未neng充分混合。

解jueban法: 试剂加完后,需轻敲盘四周使其充分混合均匀。

b.原因:洗板过chengfa生问题(2-f.)

解jueban法:请参考2-f.

c.原因:添加样品或酶标记物的量不yi謑ongⅫ/span>

解jueban法: 请参考2-d.

留言
标题
联xiren
联xidian话
内容
验证码
点击换yi张
注:1.可以使用快jie键Alt+S或Ctrl+Enterfa送xin息!
2.如you必要,请nin留下nin的详细联xi方式!