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renfeng闭蛋白5(CLDN5)试剂盒

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名称: renfeng闭蛋白5(CLDN5)试剂盒
型号: CLDN5
zhan商: ELISA试剂盒
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简单介绍

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renfeng闭蛋白5(CLDN5)试剂盒  的详xi介绍


renfeng闭蛋白5(CLDN5)试剂盒

使yongshuo明书

renfeng闭蛋白5(CLDN5)试剂盒基ben原理:

ben试剂盒采yong双夹xinELISAfa。yong抗renCLDN5bao被于酶标板上,实验时yang品或标譲ifen械膔enCLDN5与bao被结合,youli的成fen被洗去。yi次加入生物素化的抗renCLDN5和辣genguoyang化物酶标记的亲和素。抗renCLDN5与结合在bao被上的renCLDN5结合、生物素与亲和素特异性结合而形成**复合物,youli的成fen被洗去。加入显色底物(TMB),TMB在辣genguoyang化物酶的催化下cheng现蓝色,加终止液后变成黄色。yong酶标仪在450nm波长处测OD值,renCLDN5浓度与OD450值之jiancheng正bi,通guo绘制标准曲线jisuan出yang苀en衦enCLDN5的浓秖uⅫ/span>

renfeng闭蛋白5(CLDN5)试剂盒描shu:

英文名称 Human CLDN5 (Claudin 5) ELISA Kit
中文名称 renfeng闭蛋白5(CLDN5)酶联**吸附测ding试剂盒
huo号 X-EL-H1630c 种属 Human/ren
规格 96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)
检测方fa 双夹xinfa
检测范wei 0.156~10ng/mL 灵敏度 0.094ng/mL

试剂盒组成:

中文名称

英文名称

规格

保存

  ELISA酶标板(可拆卸)

  Micro ELISA  Plate(Dismountable)

  8×12 / 8×6*

4/-20 #

冻干标譲i饵/span>

Reference Standard

  2/1 zhi*

4/-20 #

标譲i饵/span>&yang品稀shi液

Reference Standard & Sample Diluent

  1ping 20mL/12mL*

4

浓缩生物素化

Concentrated Biotinylated Detection Ab

  1zhi 120μL/70μL*

4/-20 #

生物素化稀shi液

Biotinytated Detection Ab Diluent

  1ping 10mL/6mL*

4

浓缩HRP酶结合物

Concentrated HRP Conjugate

  1zhi 120μL/70μL*

4(bi光)

酶结合物稀shi液

HRP Conjugate Diluent

  1ping 10mL/6mL*

4

浓缩洗di液(25×

ConcentratedWashBuffer (25×)

  1ping 30mL/16mL*

4

底物溶液(TMB

Substrate Reagent

  1ping 10mL/6mL*

4(bi光)

反应终止液

Stop Solution

  1ping 10mL/6mL*

4

feng板覆mo

Plate Sealer

  5/3 *

 

shuo明书

Product  Description

  1 

 

质检baogao

Certificate of Analysis

  1 

 

特bieshuo明
*: [96T/48T](打kaibao装后请及时检查所有物品是fu齐全完zheng)
#: 
一周内使yong可存于4℃,xu长时jian存fang或多次使yong建议存于-20.                                      

renfeng闭蛋白5(CLDN5)试剂盒检测前准备工作:

1. 请提前20fenzhong从冰箱中qu出试剂盒,pinghengzhi室温。

2. 将浓缩洗di液yong双蒸水稀shi(1:25)。weiyong完的fang回4℃。从冰箱中qu出的浓缩洗di液可能有结晶,属于正常现xiang,可yong40℃水yu微加热使结晶完全溶解后再配制洗di液(加热温度不要超guo50℃,使yong时洗di液应为室温)。礲i帐箉ong。

3. 标譲i饵/span>10000×glixin1fenzhong,加入标譲i饵/span>&yang品稀shi液1.0mLzhi冻干标譲ifen校鬵uan盖,jing置10fenzhong,上下颠倒shu次,待其chongfen溶解后,yong移液qi将其qingqing混匀(浓度为8000pg/mL)。然后gen据xu要jin行倍bi稀shi(注:不要直接在反应孔中jin行倍bi稀shi)。建议配制成以下浓度:按照稀shi方fatu例 标譲i饵/span>&yang品稀shi液直接作为kong白孔0ng/mL。如配制5ng/mL标譲i罚簈u0.5mL10ng/mL的上shu标譲i芳尤牒宵/span>0.5mL标譲i饵/span>&yang品稀shi液的EPguan中,混匀即可,其余浓度yi此类推。 

4. 生物素化工作液:实验前jisuan当次实验所xuyong量(以100μL/孔ji),实际配制时应多配制100-200μL。使yong前15fenzhong,以生物素化稀shi液稀shi浓缩生物素化(1:100)成工作浓秖u5bi帐箉ong。

5. 酶结合物工作液:实验前jisuan当次实验所xuyong量(以100μL/孔ji),实际配制时应多配制100-200μL。使yong前15fenzhong,以酶结合物稀shi液稀shi浓缩HRP酶结合物(1:100)成工作浓秖uⅫ/span>

礲i帐箉ong。

renfeng闭蛋白5(CLDN5)试剂盒标譲i废hi方fatu例:(以500μL/guan为例,也可gen据实际yong量来稀shi,如200μL/guan)

            

1. 在各孔中加入标譲i坊騳ang品各100μL 37℃fu育90fenzhong

2. 加入100μ生物素化工作液,37℃fu育60fenzhong

3. 洗di3

4. 加入100μL酶结合物工作液, 37℃fu育30fenzhong

5. 洗di5

6. 加入90μL底物溶液, 37℃fu育15fenzhongzuo右

7. 加入50μL终止液,立即在450nm波长处测量OD

8. 结果jisuan

一、操作因素duiELISA结果的影响ELISA操作步骤复杂,操作不当将yinqi较大的误差。以下叙shu各个步骤中的影响因素。

1.加yang

2.温育

3.洗di

4.显色

5.bi色

二、灰区的设置通常情况下,ELISAding性实验襶u把粜yu焙汀耙跣yu崩碽aogao结果,两者jian有一条fenjie线被称为“阳性判断值”(cut-off valueCO值),这是ding性**测ding结果baogao的yi据。

三、标ben复查ELISA手工检测guocheng复杂,影响因素较多,即使室内质kong在kong,也可能因孔jian差异而造成结果的差异,因此加大复查力度是保证结果准确性的可kao方fa,bi如duiHBsAgHBeAgHCV-AbHIV-AbTP-Ab等项目的可疑、弱阳性标ben及shaojian模式的检测结果jin行复查。

四、结果判断和baogao常yong下列几謟hi絝a表shi结果:

1.ding性测ding

2.半ding量测ding 结果一般以滴度表shi。

3.ding量测ding 即yongyi知量的标譲i纷饕幌盗邢hi后jin行ELISA测ding,绘制标准曲线,结果以优良量或单位表shi。在ELISAding羕ao觳庵忻恳豢榉从Π宥糱i须绘制相应的标准曲线。

注意事项:

仔xi阅秎iao得魇椤Ⅻ/span>

检查试剂盒标签上的有效qi。如果超guo有效qi,请勿使yong。

按shuo明书确ding所有试剂齐全(shu量、体积)。

标ben制备要规范,每份标ben体积要按2-3个复孔以上的量制备(贮存),尽量fen装做备份。duanqi内无fa实验者,注意低温保存。

准备好所有实验额wai所xu物品,(bi如移液qi,试guan,清洗qi,酶标仪)。

按shuo明书将所yong试剂pinghengzhi室温,gen据检测标benshu量确ding所xu试剂的量。

检查试剂簒in诿恐质约恋闹嫣鮦ian,保证所有试剂均按照试剂簒in趕huo明书推荐的条jian存储。

检查不wending或者变质的试剂溶液(bi如沉淀或变色)。有些试糽i琤i如标譲i废hi液或者检测稀shi液,可能在设ji蔮en秃谐恋砦铩K惺约猎诘wen朊副臧逯埃琤ixuchongfen混詑u6捎诔恋砦锏奶匦裕诩尤朊副臧逯埃琤ixu不停jiao拌。

保证chongfen的fu育时jian和温秖uⅫ/span>

切勿使yong不同生产批号的试剂qu代蟴hong惺约粱蚧旌舷zhong惺约痢Ⅻ/span>

在混合或溶解蛋白溶液时,bimian泡沫产生。

在实验kai始之前,安排好实验流cheng。

在实验kai始之前,清jie工作台。

若有问题,应与wo公司或代理商的技术zhi硓hi袋/span>

renfeng闭蛋白5(CLDN5)试剂盒结果判断:

1. 每个标譲i返命/span>OD值jian去kong白孔的OD值后作tu,如设置复孔,则应qu其ping均值jisuan。以标譲i返呐ǘ任嶙辏?/span>OD值为zong坐标,绘出标准曲线。亦可以OD值为横坐标,标譲i返呐ǘ任獄ong坐标,绘出标准曲线。

2. 推荐使yong专业的曲线制作软jian,如curve expert 1.31.4,在软jianjiemian既可gen据yang品OD值,由标准曲线查出相应的浓度,乘以稀shi倍shu;亦可将yang品的OD值代入标准曲线的拟合方cheng式,jisuan出yang苀angǘ龋俪艘韵hi倍shu,即为yang品的实际浓秖uⅫ/span>

3. 若yang品OD值高于标准曲线上限,应shi当稀shi后重测,jisuan浓度时应乘以稀shi倍shu。 

renfeng闭蛋白5(CLDN5)试剂盒有效qiwending性kao察

ben试验以feng闭蛋白5(CLDN5)为例

1.        OD值:

正常保存条jian下有效qi内和超guo有效qi2个月所测OD值bi较

正常有效qi内OD值: 3.2512.8452.126, 1.859, 1.463, 1.022, 0.710, 0.08

超guo2个月有效qiOD值:3.1.7, 2.643, 2.125, 1.796, 1.453, 0.876, 0.432, 0.07

2.回收率:fenbie于ding值血清及血浆中加入一ding量的feng闭蛋白5(CLDN5)标譲i罚馗床鈊ing并jisuan其品均值,回收率为测ding謉i肜砺壑档腷i率。

        正常保存条jian下有效qi内和guo有效qi2个月elisa 试剂盒回收率检测结果

Sample

Conditions

Recovery range(%)

Average(%)

Serum(n=6)

normal

88-106

95

After 12 month

80-100

87

EDTA plasma(n=6)

normal

88-106

97

After 12 month

78-98

87

 

3.       线性:fenbie于ding值血清及血浆中加入一ding量的feng闭蛋白5(CLDN5)标譲i罚⒔阞en按1:2,1:4,1:8稀shi,线性范wei即为稀shi后yangben中feng闭蛋白5(CLDN5)含量的测ding謉i肜砺壑档腷i率。

         正常保存条jian下有效qi内和guo有效qi2个月elisa 试剂盒回线性检测结果

Sample

Conditions

1:2

1:4

1:8

Serum(n=6)

normal

81-92%

85-90%

89-105%

After 12month

80-88%

82-87%

87-101%

EDTA plasma(n=6)

normal

93-104%

81-97%

91-96%

After 12month

82-95%

75-82%

74-90%

 

4.        精密度:以yang品测ding值的变异系shuCV表shi。CV%=SD/meanx100

批内差:qu同一批次试剂盒dui低值,中值和高值yangbenjin行ding羕ao觳猓糠輞angben测ding20次,fenbiejisuan不同浓度yangben的ping均值和SD值。

批jian差:选qu 3 个不同批次的试剂盒fenbiedui低、中、高值ding值yangbenjin行ding量测ding, 每个yangben使yong同一试剂盒重复测ding 8 次,fenbiejisuan不同浓度yangben的ping均值及 SD 值。(批内差: CV<10%;批jian差: CV<11%)

       正常保存条jian下有效qi内和guo有效qi2个月elisa 试剂盒回精密度检测结果

                    Intra-assay precision

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

16.68

14.22

70.25

62.36

369.75

327.88

SD

1.08

1.25

4.21

5.31

24.69

32.87

CV(%)

6.5

8.8

6.0

8.5

6.6

10

 

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

Sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

18.72

13.68

65.98

61.25

387.22

425.26

SD

1.45

1.52

4.83

5.18

28.49

36.87

CV%

7.7

11.1

7.3

8.5

7.3

8.7

renfeng闭蛋白5(CLDN5)试剂盒会出现的问题及解决办fa:

1. 加入反应终止液后,没有吸光值或吸光值偏低。

a.原因:wei加入酶标记物。

解决办fa:请按照操作步骤jin行。

b.原因:试剂簒in谌菸飛ei能chongfen回。

解决办fa:确ding试剂簒in谌菸锘匚潞笤賘in行操作。

c.原因:室温太低。

解决办fa:若室温太低(<19),请于操作步骤4,shi当延长温育时jian。

d.原因:wei使yong试剂盒的清洗液清洗。

解决办fa: 请yong试剂簒in谒醙ong的清洗液清洗。

e.原因:试剂盒yiguo有效qi限。

解决办fa:请genghuan成仍在有效qi限内的试剂盒。

2. 标准曲线线性不jia,或是ping行性不好。

a.原因:温育位置bi光不好或受到气流干扰。

解决办fa: 请确认温育位置既不透光也不透feng(如抽屉内)

b.原因:操作时jian拖太久。

解决办fa:请在方fa熟练后再jin行操作。

c.原因:微孔jian相hu污染。

解决办fa: 加yang品时,请小xin勿溅出微孔wai,以mian造成其它微孔的污染。

d.原因:标譲i坊蛎副昙俏锼尤氲牧坎灰恢隆Ⅻ/span>

解决办fa:请使yongyi校正guo的移液枪,并确保其与吸蚮en甹ian有高度密合衴uⅫ/span>

e.原因:添加yang品或试剂的操作方fa不正确。

解决办fa:加yang品或试剂时,吸头请勿接触微孔。

f.原因:洗板guocheng发生问题(如guan路堵塞、洗完板后wei立刻jin行下一步骤)

解决办fa:请sui时监kong洗板机洗板guocheng,洗完后立即jin行下一步骤。

3. 吸光值均偏高(或线性不够陡)

a.原因:室温太高(>25)

解决办fa: 若无fa降低室内温度,请shi当缩duan步骤4的温育时jian。

b.原因:底物溶液受到污染。

解决办fa: 若发现底物溶液yicheng现淡蓝色,请不要再使yong。

c.原因:反应时jian超guo太久。

解决办fa:请kong制反应时jian。

d.原因:酶标记物污染liao簒in谄渌约痢Ⅻ/span>

解决办fa:使yongguo的吸头应立即丢弃,可bimian试剂jian相hu污染,凡是试剂(特bie是酶标记物与底物溶液)接触guo的容qi应立即清洗干净。(先以漂白水浸泡,再以清水冲洗干净,可确保无残留)

4. 阴性标譲i返奈庵档陀谘粜员曜ji返奈庵怠Ⅻ/span>

a.原因:微孔中的试剂wei能chongfen混合。

解决办fa: 试剂加完后,xuqing敲pan四周使其chongfen混合均詑uⅫ/span>

b.原因:洗板guocheng发生问题(2-f.)

解决办fa:请参kao2-f.

c.原因:添加yang品或酶标记物的量不一致。

解决办fa: 请参kao2-d.

 

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