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人原纤蛋白1(FBN1)试剂盒

如果您对gai感兴qu的话,ke以
名称: 人原纤蛋白1(FBN1)试剂盒
xing号: FBN1
展商: ELISA试剂盒
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人原纤蛋白1(FBN1)试剂盒  的xiangxijie绍


人原纤蛋白1(FBN1)试剂盒

使yong说明书

人原纤蛋白1(FBN1)试剂盒ji本原理:

本试剂盒采yong双jia心ELISA法。yong抗人FBN1包被于酶biao板上,shi验时样品huobiaozhun品zhong的人FBN1与包被jiehe,youli的cheng分被洗去。襩ai蝚ia入sheng物素化的抗人FBN1和lagen过氧化物酶biao记的亲和素。抗人FBN1与jiehe在包被上的人FBN1jiehe、sheng物素与亲和素te异性jieheerxingcheng**fuhe物,youli的cheng分被洗去。jia入显色底物(TMB),TMB在lagen过氧化物酶的催化下呈现蓝色,jia终止液hou变cheng黄色。yong酶biao仪在450nm波长处ceOD值,人FBN1浓度与OD450值之间硈hou龋ü鎧hibiaozhun曲线计算出样品zhong人FBN1的浓度。

人原纤蛋白1(FBN1)试剂盒描述:

英文名称 Human FBN1 (Fibrillin 1) ELISA Kit
zhong文名称 人原纤蛋白1(FBN1)酶lian**吸fuceding试剂盒
huo号 X-EL-H2266c zhong属 Human/人
规格 96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)
检ce方法 双jia心法
检ce范围 0.313~20ng/mL 灵敏度 0.188ng/mL

试剂盒组cheng:

zhong文名称

英文名称

规格

保存

  ELISA酶biao板(ke拆卸)

  Micro ELISA  Plate(Dismountable)

  8×12 / 8×6*

4/-20 #

dong干biaozhun品

Reference Standard

  2/1 zhi*

4/-20 #

biaozhun品&样品稀shi液

Reference Standard & Sample Diluent

  1 20mL/12mL*

4

浓缩sheng物素化

Concentrated Biotinylated Detection Ab

  1zhi 120μL/70μL*

4/-20 #

sheng物素化稀shi液

Biotinytated Detection Ab Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩HRP胒u醜e物

Concentrated HRP Conjugate

  1zhi 120μL/70μL*

4(避光)

胒u醜e物稀shi液

HRP Conjugate Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩洗涤液(25×

ConcentratedWashBuffer (25×)

  1 30mL/16mL*

4

底物rong液(TMB

Substrate Reagent

  1 10mL/6mL*

4(避光)

反应终止液

Stop Solution

  1 10mL/6mL*

4

封板覆膜

Plate Sealer

  5/3 *

 

说明书

Product  Description

  1 

 

质检报告

Certificate of Analysis

  1 

 

te别说明
*: [96T/48T](打开包装hou请及时检查所you物品是否qi全完zheng)
#: 
一周内使yongke存于4℃,需长时间存放huo多ci使yong建议存于-20.                                      

人原纤蛋白1(FBN1)试剂盒检ce前zhun备工作:

1. 请提前20穤hong哟颖鋤hong取出试剂盒,平heng至室温。

2. 将浓缩洗涤液yong双蒸水稀shi(1:25)。未yong完的放回4℃。从冰箱zhong取出的浓缩洗涤液kenengyoujie晶,属于正常现象,keyong40℃水浴微jia热使jie晶完全rong解hou再配zhi洗涤液(jia热温度不yaochao过50℃,使yong时洗涤液应为室温)。当日使yong。

3. biaozhun品10000×gli心1穤hong樱琷ia入biaozhun品&样品稀shi液1.0mL至dong干biaozhun品zhong,旋jin管gai,静置10穤hong樱舷碌叩故齝i,待qi充分rong解hou,yongyi液qi将qiqingqinghun匀(浓度为8000pg/mL)。然hougen据需yao进行bei比稀shi(zhu:不yao直接在反应孔zhong进行bei比稀shi)。建议配zhicheng以下浓度:按zhao稀shi方法tu例 biaozhun品&样品稀shi液直接作为空白孔0ng/mL。如配zhi5ng/mLbiaozhun品:取0.5mL10ng/mL的上述biaozhun品jia入含you0.5mLbiaozhun品&样品稀shi液的EP管zhong,hun匀即ke,qi余浓度襩ai死嗤啤Ⅻ/span> 

4. sheng物素化工作液:shi验前计算当cishi验所需yong量(以100μL/縵hun疲瑂hi际配zhi时应多配zhi100-200μL。使yong前15穤hong樱詓heng物素化稀shi襤ehi浓缩sheng物素化(1:100)cheng工作浓度。当日使yong。

5. 胒u醜e物工作液:shi验前计算当cishi验所需yong量(以100μL/縵hun疲瑂hi际配zhi时应多配zhi100-200μL。使yong前15穤hong樱悦fu醜e物稀shi襤ehi浓缩HRP胒u醜e物(1:100)cheng工作浓度。

当日使yong。

人原纤蛋白1(FBN1)试剂盒biaozhun品稀shi方法tu例:(以500μL/管为例,yekegen据shi际yong量lai稀shi,如200μL/管)

            

1. 在各孔zhongjia入biaozhun品huo样品各100μL 37℃孵yu90穤hong尹/span>

2. jia入100μsheng物素化工作液,37℃孵yu60穤hong尹/span>

3. 洗涤3ci

4. jia入100μL胒u醜e物工作液, 37℃孵yu30穤hong尹/span>

5. 洗涤5ci

6. jia入90μL底物rong液, 37℃孵yu15穤hong幼笥腰/span>

7. jia入50μL终止液,立即在450nm波长处ce量OD

8. jie果计算

一、操作因素对ELISAjie果的影xiangELISA操作buzhoufu杂,操作不当将引起较大的误差。以下叙述各个buzhouzhong的影xiang因素。

1.jia样

2.温yu

3.洗涤

4.显色

5.比色

二、灰区的设置通常情kuang下,ELISAding性shi验以“阳性”和“阴性”lai报告jie果,liang者间you一条分界线被称为“阳性pan断值”(cut-off valueCO值),这是ding性**cedingjie果报告的依据。

san、biao本fu查ELISA手工检ce过程fu杂,影xiang因素较多,即使室内质kong在kong,yekeneng因縵hun洳钜靍r造chengjie果的差异,因cijia大fu查力度是保证jie果zhun确性的kekao方法,比如对HBsAgHBeAgHCV-AbHIV-AbTP-Ab等项目的ke疑、弱阳性biao本及少见mo蔶iang募靋ejie果进行fu查。

四、jie果pan断和报告常yong下列几zhong方法biao示jie果:

1.ding性ceding

2.半ding量ceding jie果一般以滴度biao示。

3.ding量ceding 即yong已zhi量的biaozhun品作一系列稀shihou进行ELISAceding,绘zhibiaozhun曲线,jie果以优liang量huo单位biao示。在ELISAding羕ao靋ezhong每一块反应板都bixu绘zhi相应的biaozhun曲线。

zhu意事项:

zixi阅du说明书。

检查试剂盒biao签上的you效qi。如果chao过you效qi,请勿使yong。

癱i得魇槿穌ing所you试剂qi全(数量、体积)。

biao本zhi备yao规范,每份biao本体积yao按2-3个fu孔以上的量zhi备(zhu存),尽量分装做备份。短qi内wu法shi验者,zhu意低温保存。

zhun备好所youshi验额外所需物品,(比如yi液qi,试管,清洗qi,酶biao仪)。

癱i得魇榻鵼ong试剂平heng至室温,gen据检cebiao本数量确ding所需试剂的量。

检查试剂盒内每zhong试剂的zhu存条件,保证所you试剂均按zhao试剂盒内说明书推jian的条件存储。

检查不稳dinghuo者变謘hi氖约羠ong液(比如chen淀huo变色)。you些试剂,比如biaozhun品稀shi液huo者检ce稀shi液,keneng在设计时就含youchen淀物。所you试剂在滴入酶biao板之前,bi需充分hun匀。er由于chen淀物的te性,在jia入酶biao板之前,bi需不停搅拌。

保证充分的孵yu时间和温度。

莤ing鹗箉ong不同sheng产批号的试剂取代现you试剂huohunhe现you试剂。

在hunhehuorong解蛋白rong液时,避免泡mo产sheng。

在shi验开始之前,安排好shi验流程。

在shi验开始之前,清洁工作台。

若you问题,应与我gong司huo代理商的技shuzhi持lian系

人原纤蛋白1(FBN1)试剂盒jie果pan断:

1. 每个biaozhun品的OD值jian去空白孔的OD值hou作tu,如设置fu孔,则应取qi平均值计算。以biaozhun品的浓度为横坐biao,OD值为纵坐biao,绘出biaozhun曲线。亦ke以OD值为横坐biao,biaozhun品的浓度为纵坐biao,绘出biaozhun曲线。

2. 推jian使yong专业的曲线zhi作软件,如curve expert 1.3huo1.4,在软件界面既kegen据样品OD值,由biaozhun曲线查出相应的浓度,乘以稀shibei数;亦ke将样品的OD值代入biaozhun曲线的拟he方程式,计算出样品浓度,再乘以稀shibei数,糲i返膕hi际浓度。

3. 若样品OD值高于biaozhun曲线上xian,应蕇hi毕hihou重ce,计算浓度时应乘以稀shibei数。 

原纤蛋白1(FBN1)试剂盒you效qi稳ding性kao察

本试验以原纤蛋白1(FBN1)为例

1.        OD值:

正常保存条件下you效qi内和chao过you效qi2个月所ceOD值比较

正常you效qi内OD值: 3.2512.8452.126, 1.859, 1.463, 1.022, 0.710, 0.08

chao过2个月you效qiOD值:3.1.7, 2.643, 2.125, 1.796, 1.453, 0.876, 0.432, 0.07

2.回shou率:分别于ding值血清及血浆zhongjia入一ding量的原纤蛋白1(FBN1)biaozhun品,重fuceding并计算qi品均值,回shou率为ceding值与理lun值的比率。

        正常保存条件下you效qi内和过you效qi2个月elisa 试剂盒回shou率检cejie果

Sample

Conditions

Recovery range(%)

Average(%)

Serum(n=6)

normal

88-106

95

After 12 month

80-100

87

EDTA plasma(n=6)

normal

88-106

97

After 12 month

78-98

87

 

3.       线性:分别于ding值血清及血浆zhongjia入一ding量的原纤蛋白1(FBN1)biaozhun品,并将biao本按1:2,1:4,1:8稀shi,线性范围糲ihihou样本zhong原纤蛋白1(FBN1)含量的ceding值与理lun值的比率。

         正常保存条件下you效qi内和过you效qi2个月elisa 试剂盒回线性检cejie果

Sample

Conditions

1:2

1:4

1:8

Serum(n=6)

normal

81-92%

85-90%

89-105%

After 12month

80-88%

82-87%

87-101%

EDTA plasma(n=6)

normal

93-104%

81-97%

91-96%

After 12month

82-95%

75-82%

74-90%

 

4.        精mi度:以样品ceding值的变异系数CVbiao示。CV%=SD/meanx100

批内差:取同一批ci试剂盒对低值,zhong值和高值样本进行ding羕ao靋e,每份样本ceding20ci,分别计算不同浓度样本的平均值和SD值。

批间差:选取 3 个不同批ci的试剂盒分别对低、zhong、高值ding值样本进行ding量ceding, 每个样本使yong同一试剂盒重fuceding 8 ci,分别计算不同浓度样本的平均值及 SD 值。(批内差: CV<10%;批间差: CV<11%)

       正常保存条件下you效qi内和过you效qi2个月elisa 试剂盒回精mi度检cejie果

                    Intra-assay precision

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

16.68

14.22

70.25

62.36

369.75

327.88

SD

1.08

1.25

4.21

5.31

24.69

32.87

CV(%)

6.5

8.8

6.0

8.5

6.6

10

 

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

Sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

18.72

13.68

65.98

61.25

387.22

425.26

SD

1.45

1.52

4.83

5.18

28.49

36.87

CV%

7.7

11.1

7.3

8.5

7.3

8.7

人原纤蛋白1(FBN1)试剂盒会出现的问题及解jue办法:

1. jia入反应终止液hou,没you吸光值huo吸光值偏低。

a.原因:未jia入酶biao记物。

解jue办法:请按zhao操作buzhou进行。

b.原因:试剂盒内rong物未neng充分回。

解jue办法:确ding试剂盒内rong物回温hou再进行操作。

c.原因:室温太低。

解jue办法:若室温太低(<19),请于操作buzhou4,蕇hi毖映の聐u时间。

d.原因:未使yong试剂盒的清洗液清洗。

解jue办法: 请yong试剂盒内所提供的清洗液清洗。

e.原因:试剂盒已过you效qixian。

解jue办法:请更换cheng仍在you效qixian内的试剂盒。

2. biaozhun曲线线性不jia,huo是平行性不好。

a.原因:温yu位置避光不好huoshou到气流干扰。

解jue办法: 请确认温yu位置既不透光ye不透风(如抽屉内)

b.原因:操作时间拖太久。

解jue办法:请在方法熟练hou再进行操作。

c.原因:微縵hun湎嗷ノ廴尽Ⅻ/span>

解jue办法: jia样品时,请小心勿溅出微孔外,以免造chengqi它微孔的污染。

d.原因:biaozhun品huo酶biao记物所jia入的量不一致。

解jue办法:请使yong已校正过的yi液qiang,并确保qi与吸头之间you高度mihe性。

e.原因:添jia样品huo试剂的操作方法不正确。

解jue办法:jia样品huo试剂时,吸头请勿接触微孔。

f.原因e窗骞谭heng问题(如管路堵塞、洗完板hou未立刻进行下一buzhou)

解jue办法:请随时监kong洗板机洗板过程,洗完hou立即进行下一buzhou。

3. 吸光值均偏高(huo线性不够陡)

a.原因:室温太高(>25)

解jue办法: 若wu法jiang低室内温度,请蕇hi彼醵蘠uzhou4的温yu时间。

b.原因:底物rong液shou到污染。

解jue办法: 若发现底物rong液已呈现淡蓝色,请不yao再使yong。

c.原因:反应时间chao过太久。

解jue办法:请kongzhi反应时间。

d.原因:酶biao记物污染了盒内qi它试剂。

解jue办法:使yong过的吸头应立即丢弃,ke避免试糽iang湎嗷ノ廴荆彩鞘约傈/span>(te别是酶biao记物与底物rong液)接触过的rongqi应立即清洗干净。(先以漂白水浸泡,再以清水冲洗干净,ke确保wu残留)

4. 阴性biaozhun品的吸光值低于阳性biaozhun品的吸光值。

a.原因:微孔zhong的试剂未neng充分hunhe。

解jue办法: 试糽iang油阧ou,需qing敲pan四周使qi充分hunhe均匀。

b.原因e窗骞谭heng问题(2-f.)

解jue办法:请参kao2-f.

c.原因:添jia样品huo酶biao记物的量不一致。

解jue办法: 请参kao2-d.

 

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