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人α1酸性tang蛋白(α1-AGP)shi剂盒

如guo您对gai感兴趣的话,可以
名称: 人α1酸性tang蛋白(α1-AGP)shi剂盒
型号: α1-AGP
展商: ELISAshi剂盒
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简单介绍

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人α1酸性tang蛋白(α1-AGP)shi剂盒  的详细介绍


人α1酸性tang蛋白(α1-AGP)shi剂盒

使用shuomingshu

人α1酸性tang蛋白(α1-AGP)shi剂盒基ben原理:

benshi剂盒cai用双夹心ELISA法。用抗人α1-AGP包被于酶标ban上,shiyan时样品huo标准品中的人α1-AGPyu包被结合,游li的cheng分被洗qu。依ci加入生物素化的抗人α1-AGPhela根过氧化物酶标记的亲he素。抗人α1-AGPyu结簒ian诎簧系娜甩?-AGP结合、生物素yu亲he素特异性结合er形cheng**复合物,游li的cheng分被洗qu。加入xian色di物(TMB),TMB在la根过氧化物酶的催化xiacheng现lan色,加终止ye后变cheng黄色。用酶标yi在450nmbo长chu测OD值,人α1-AGP浓度yuOD450值之间chengzheng比,通过绘制标准曲线计suan出样品中人α1-AGP的浓度。

人α1酸性tang蛋白(α1-AGP)shi剂盒描述:

英文名称 Human α1-AGP (Alpha-1-Acid Glycoprotein) ELISA Kit
中文名称 人α1酸性tang蛋白(α1-AGP)酶联**吸附测定shi剂盒
货号 X-EL-H0001c 种属 Human/人
规ge 96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)
检测方法 双夹心法
检测范围 3.125~200ng/mL lingmin度 1.875ng/mL

shi剂盒组cheng:

中文名称

英文名称

规ge

保存

  ELISA酶标ban(可拆卸)

  Micro ELISA  Plate(Dismountable)

  8×12 / 8×6*

4/-20 #

冻干标准品

Reference Standard

  2/1 zhi*

4/-20 #

标准品&样品稀释ye

Reference Standard & Sample Diluent

  1 20mL/12mL*

4

浓suo生物素化

Concentrated Biotinylated Detection Ab

  1zhi 120μL/70μL*

4/-20 #

生物素化稀释ye

Biotinytated Detection Ab Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓suoHRP酶结合物

Concentrated HRP Conjugate

  1zhi 120μL/70μL*

4(避光)

酶结合物稀释ye

HRP Conjugate Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓suo洗涤ye(25×

ConcentratedWashBuffer (25×)

  1 30mL/16mL*

4

di物溶ye(TMB

Substrate Reagent

  1 10mL/6mL*

4(避光)

反应终止ye

Stop Solution

  1 10mL/6mL*

4

封ban覆膜

Plate Sealer

  5/3 *

 

shuomingshu

Product  Description

  1 

 

质检bao告

Certificate of Analysis

  1 

 

特别shuoming
*: [96T/48T](打开包装后请及时检查所有物品是否qi全wan整)
#: 
一周内使用可存于4℃,需长时间存放huo多ci使用jian议存于-20.                                      

人α1酸性tang蛋白(α1-AGP)shi剂盒检测前准bei工作:

1. 请提前20分钟从bing箱中取出shi剂簒iao絟eng至室温。

2. 将浓suo洗涤ye用双zheng水稀释(1:25)。未用wan的放回4℃。从bing箱中取出的浓suo洗涤ye可能有结晶,属于zhengchang现象,可用40℃水yuwei加热使结晶wan全溶解后再配制洗涤ye(加热温度buyao超过50℃,使用时洗涤ye应为室温)。当日使用。

3. 标准品10000×gli心1分钟,加入标准品&样品稀释ye1.0mL至冻干标准品謝iao艄芨牵仓曼/span>10分钟,上xia颠倒数ci,dai其充分溶解后,用移ye器将其轻轻混匀(浓度为8000pg/mL)。然后根据需yao进行倍比稀释(注:buyao直接在反应孔中进行倍比稀释)。jian议配制cheng以xia浓度:an照稀释方法图例 标准品&样品稀释ye直接作为kong白孔0ng/mL。如配制5ng/mL标准品:取0.5mL10ng/mL的上述标准品加入含有0.5mL标准品&样品稀释ye的EP管謝iao煸燃纯桑鋣u浓度依此类tui。 

4. 生物素化工作ye:shiyan前计suan当cishiyan所需用liang(以100μL/孔计),shi际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟,以生物素化稀释ye稀释浓suo生物素化(1:100)cheng工作浓度。当日使用。

5. 酶结合物工作ye:shiyan前计suan当cishiyan所需用liang(以100μL/孔计),shi际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟,以酶结合物稀释ye稀释浓suoHRP酶结合物(1:100)cheng工作浓度。

当日使用。

人α1酸性tang蛋白(α1-AGP)shi剂盒标准品稀释方法图例:(以500μL/管为例,也可根据shi际用liang来稀释,如200μL/管)

            

1. 在各孔中加入标准品huo样品各100μL 37℃孵育90分钟

2. 加入100μ生物素化工作ye,37℃孵育60分钟

3. 洗涤3ci

4. 加入100μL酶结合物工作ye, 37℃孵育30分钟

5. 洗涤5ci

6. 加入90μLdi物溶ye, 37℃孵育15分钟左右

7. 加入50μL终止ye,li即在450nmbo长chu测liangOD

8. 结guo计suan

一、操作因素对ELISA结guo的ying响ELISA操作步骤复杂,操作bu当将引起jiaoda的误cha。以xiaxu述各个步骤中的ying响因素。

1.加样

2.温育

3.洗涤

4.xian色

5.比色

二、粂i纳柚猛╟hang情况xia,ELISA定性shiyan襶u把粜yu県e“阴衴u崩碽ao告结guo,两者间有一条分界线被称为“阳性panduan值”(cut-off valueCO值),这是定性**测定结guobao告的依据。

三、标ben复查ELISA手工检测过程复杂,ying响因素jiao多,即使室内质控在控,也可能因孔间cha异er造cheng结guo的cha异,因此加da复查力度是保证结guo准确性的可靠方法,比如对HBsAgHBeAgHCV-AbHIV-AbTP-Ab等项目的可yi、弱阳衴uan阞en及shao见mo蔶iang募觳饨醙uo进行复查。

四、结guopanduanhebao告chang用xia列几种方法表示结guo:

1.定性测定

2.半定liang测定 结guo一般以滴度表示。

3.定liang测定 即用已知liang的标准品作一系列稀释后进行ELISA测定,绘制标准曲线,结guo以youlianglianghuo单位表示。在ELISA定liang检测中每一kuai反应ban都必须绘制相应的标准曲线。

注意事项:

仔细yue读shuomingshu。

检查shi剂盒标签上的有效期。如guo超过有效期,请勿使用。

anshuomingshu确定所有shi剂qi全(数liang、体积)。

标ben制beiyao规范,每份标ben体积yaoan2-3个复孔以上的liang制bei(zhu存),尽liang分装做bei份。短期内无法shiyan者,注意低温保存。

准bei好所有shiyan额外所需物品,(比如移ye器,shi管,清洗器,酶标yi)。

anshuomingshu将所用shi剂平heng至室温,根据检测标ben数liang确定所需shi剂的liang。

检查shi剂盒内每种shi剂的zhu存条件,保证所有shi剂均an照shi剂盒内shuomingshutui荐的条件存储。

检查buwen定huo者变謘hi膕hi剂溶ye(比如沉淀huo变色)。有xieshi剂,比如标准品稀释yehuo者检测稀释ye,可能在设计时jiu含有沉淀物。所有shi剂在祑en朊副阞an之前,必需充分混匀。eryou于沉淀物的特性,在加入酶标ban之前,必需bu停搅拌。

保证充分的孵育时间he温度。

切勿使用bu同生产批号的shi剂取代现有shi剂huo混合现有shi剂。

在混合huo溶解蛋白溶ye时,避免泡沫产生。

在shiyan开始之前,安pai好shiyan流程。

在shiyan开始之前,清洁工作台。

若有wen题,应yu我公司huo代理商的技shuzhichi联系

人α1酸性tang蛋白(α1-AGP)shi剂盒结guopanduan:

1. 每个标准品的OD值jianqukong白孔的OD值后作图,如设置复孔,ze应取其平均值计suan。襶uan曜计返呐ǘ任嶙辏?/span>OD值为zong坐标,绘出标准曲线。亦可以OD值为横坐标,标准品的浓度为zong坐标,绘出标准曲线。

2. tui荐使用zhuan业的曲线制作软件,如curve expert 1.3huo1.4,在软件界面既可根据样品OD值,you标准曲线查出相应的浓度,cheng以稀释倍数;亦可将样品的OD值代入标准曲线的拟合方程式,计suan出样品浓度,再cheng以稀释倍数,糲i返膕hi际浓度。

3. 若样品OD值高于标准曲线上限,应蕇hi毕∈秃髗hong测,计suan浓度时应cheng以稀释倍数。 

α1酸性tang蛋白(α1-AGP)shi剂盒有效期wen定性kao察

benshiyan以α1酸性tang蛋白(α1-AGP)为例

1.        OD值:

zhengchang保存条件xia有效期内he超过有效期2个月所测OD值比jiao

zhengchang有效期内OD值: 3.2512.8452.126, 1.859, 1.463, 1.022, 0.710, 0.08

超过2个月有效期OD值:3.1.7, 2.643, 2.125, 1.796, 1.453, 0.876, 0.432, 0.07

2.回收率:分别于定值血清及血浆中加入一定liang的α1酸性tang蛋白(α1-AGP)标准品,zhong复测定并计suan其品均值,回收率为测定值yu理论值的比率。

        zhengchang保存条件xia有效期内he过有效期2个月elisa shi剂盒回收率检测结guo

Sample

Conditions

Recovery range(%)

Average(%)

Serum(n=6)

normal

88-106

95

After 12 month

80-100

87

EDTA plasma(n=6)

normal

88-106

97

After 12 month

78-98

87

 

3.       线性:分别于定值血清及血浆中加入一定liang的α1酸性tang蛋白(α1-AGP)标准品,并将标benan1:2,1:4,1:8稀释,线性范围糲i∈秃笱鵥en中α1酸性tang蛋白(α1-AGP)含liang的测定值yu理论值的比率。

         zhengchang保存条件xia有效期内he过有效期2个月elisa shi剂盒回线性检测结guo

Sample

Conditions

1:2

1:4

1:8

Serum(n=6)

normal

81-92%

85-90%

89-105%

After 12month

80-88%

82-87%

87-101%

EDTA plasma(n=6)

normal

93-104%

81-97%

91-96%

After 12month

82-95%

75-82%

74-90%

 

4.        精密度:以样苀an舛ㄖ档谋湟煜凳?/span>CV表示。CV%=SD/meanx100

批内cha:取同一批cishi剂盒对低值,中值he高值样ben进行定liang检测,每份样ben测定20ci,分别计suanbu同浓度样ben的平均值heSD值。

批间cha:选取 3 个bu同批ci的shi剂盒分别对低、中、高值定值样ben进行定liang测定, 每个样ben使用同一shi剂盒zhong复测定 8 ci,分别计suanbu同浓度样ben的平均值及 SD 值。(批内cha: CV<10%;批间cha: CV<11%)

       zhengchang保存条件xia有效期内he过有效期2个月elisa shi剂盒回精密度检测结guo

                    Intra-assay precision

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

16.68

14.22

70.25

62.36

369.75

327.88

SD

1.08

1.25

4.21

5.31

24.69

32.87

CV(%)

6.5

8.8

6.0

8.5

6.6

10

 

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

Sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

18.72

13.68

65.98

61.25

387.22

425.26

SD

1.45

1.52

4.83

5.18

28.49

36.87

CV%

7.7

11.1

7.3

8.5

7.3

8.7

人α1酸性tang蛋白(α1-AGP)shi剂盒会出现的wen题及解决办法:

1. 加入反应终止ye后,没有吸光值huo吸光值偏低。

a.原因:未加入酶标记物。

解决办法:请an照操作步骤进行。

b.原因:shi剂盒内容物未能充分回。

解决办法:确定shi剂盒内容物回温后再进行操作。

c.原因:室温太低。

解决办法:若室温太低(<19),请于操作步骤4,蕇hi毖映の掠奔洹Ⅻ/span>

d.原因:未使用shi剂盒的清洗ye清洗。

解决办法: 请用shi剂盒内所提供的清洗ye清洗。

e.原因:shi剂盒已过有效期限。

解决办法:请更换cheng仍在有效期限内的shi剂盒。

2. 标准曲线线性bu佳,huo是平行性bu好。

a.原因:温育位置避光bu好huo受到气流干扰。

解决办法: 请确认温育位置既butou光也butou风(如抽屉内)

b.原因:操作时间拖太久。

解决办法:请在方法熟lian后再进行操作。

c.原因:wei孔间相hu污染。

解决办法: 加样品时,请小心勿溅出wei孔外,以免造cheng其它wei孔的污染。

d.原因:标准品huo酶标记物所加入的liangbu一zhi。

解决办法:请使用已xiaozheng过的移ye枪,并确保其yu吸头之间有高度密合衴uⅫ/span>

e.原因:添加样品huoshi剂的操作方法buzheng确。

解决办法:加样品huoshi剂时,吸头请勿接触wei孔。

f.原因:洗ban过程fa生wen题(如管路dusai、洗wanban后未li刻进行xia一步骤)

解决办法:请随时监控洗ban机洗ban过程,洗wan后li即进行xia一步骤。

3. 吸光值均偏高(huo线性bu够dou)

a.原因:室温太高(>25)

解决办法: 若无法jiang低室内温度,请蕇hi眘uo短步骤4的温育时间。

b.原因:di物溶ye受到污染。

解决办法: 若fa现di物溶ye已cheng现淡lan色,请buyao再使用。

c.原因:反应时间超过太久。

解决办法:请控制反应时间。

d.原因:酶标记物污染了盒内其它shi剂。

解决办法:使用过的吸头应li即丢弃,可避免shi糽iang湎鄅u污染,fan是shi剂(特别是酶标记物yudi物溶ye)接触过的容器应li即清洗干净。(先以漂白水jin泡,再以清水chong洗干净,可确保无can留)

4. 阴衴uan曜计返奈庵档陀谘粜yuan曜计返奈庵怠Ⅻ/span>

a.原因:wei孔中的shi剂未能充分混合。

解决办法: shi糽iang觲an后,需轻敲盘四周使其充分混合均匀。

b.原因:洗ban过程fa生wen题(2-f.)

解决办法:请cankao2-f.

c.原因:添加样品huo酶标记物的liangbu一zhi。

解决办法: 请cankao2-d.

 

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