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人降钙素(CT)试剂盒

如果您duigai感兴qude话,可yi
名称: 人降钙素(CT)试剂盒
型hao: CT
展商: ELISA试剂盒
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简单介绍

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人降钙素(CT)试剂盒  de详细介绍


人降钙素(CT)试剂盒

使用说明书

人降钙素(CT)试剂盒ji本原理:

本试剂盒采用shuang夹xinELISA法。用抗人CT包被于酶标板上,实验时样pin或标譲i分衐e人CT与包被结he,游离de成分被xiqu。依次加入生物素化de抗人CT和la根过yang化物酶标记de亲和素。抗人CT与结he在包被上de人CT结he、生物素与亲和素特异性结he而形成**复he物,游离de成分被xiqu。加入显色底物(TMB),TMB在la根过yang化物酶de催化下呈现蓝色,加终zhi液后变成huang色。用酶标仪在450nm波长处测OD值,人CT浓度与OD450值之jian呈正比,通过绘制标zhun曲xianji算出样pin中人CTde浓度

人降钙素(CT)试剂盒miao述:

英文名称 Human CT (Calcitonin) ELISA Kit
中文名称 人降钙素(CT)酶联**吸附测定试剂盒
货hao X-EL-H0136c 謟hi簏/span> Human/人
规格 96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)
检测方法 shuang夹xin法
检测范围 15.625~1000pg/mL 灵敏度 9.375pg/mL

试剂盒组成:

中文名称

英文名称

规格

bao存

  ELISA酶标板(可拆卸)

  Micro ELISA  Plate(Dismountable)

  8×12 / 8×6*

4/-20 #

冻干标譲i饵/span>

Reference Standard

  2/1 zhi*

4/-20 #

标譲i饵/span>&样pin稀释液

Reference Standard & Sample Diluent

  1 20mL/12mL*

4

浓缩生物素化

Concentrated Biotinylated Detection Ab

  1zhi 120μL/70μL*

4/-20 #

生物素化稀释液

Biotinytated Detection Ab Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩HRP酶结he物

Concentrated HRP Conjugate

  1zhi 120μL/70μL*

4(避光)

酶结he物稀释液

HRP Conjugate Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩xidi液(25×

ConcentratedWashBuffer (25×)

  1 30mL/16mL*

4

底物溶液(TMB

Substrate Reagent

  1 10mL/6mL*

4(避光)

反应终zhi液

Stop Solution

  1 10mL/6mL*

4

封板竎ai|/span>

Plate Sealer

  5/3 *

 

说明书

Product  Description

  1 

 

zhi检报告

Certificate of Analysis

  1 

 

特别说明
*: [96T/48T](da开包装后qing及时检查suo有物pin是否齐全wan整)
#: 
一周na使用可存于4℃,需长时jian存fang或duo次使用jian议存于-20.                                      

人降钙素(CT)试剂盒检测前zhun备gong作:

1. qing提前20分zhong从冰箱中qu出试剂盒,平衡至室蝜ongⅫ/span>

2. jiang浓缩xidi液用shuang蒸水稀释(1:25)。wei用wandefang回4℃。从冰箱中qu出de浓缩xidi液可能有结晶,shu于正常现象,可用40℃水yu微加热使结晶wan全溶jie后zai配制xidi液(加热温度不要chao过50℃,使用时xidi液应为室温)。当日使用。

3. 标譲i饵/span>10000×g离xin1分zhong,加入标譲i饵/span>&样pin稀释液1.0mL至冻干标譲i分校艄芨牵仓曼/span>10分zhong,上下颠倒shu次,daiqichong分溶jie后,用移液器jiangqi轻轻混匀(浓度为8000pg/mL)。然后根ju需要进行倍比稀蕋ingㄗⅲ翰灰眏ie在反应孔中进行倍比稀蕋ingian议配制成yi下浓度:an照稀释方法图例 标譲i饵/span>&样pin稀释液直jie作为kong白孔0ng/mL。如配制5ng/mL标譲i罚簈u0.5mL10ng/mLde上述标譲i芳尤雋an有0.5mL标譲i饵/span>&样pin稀释液deEP管中,混匀即可,qi余浓度依此类推。 

4. 生物素化gong作液:实验前ji算当次实验suo需用liang(yi100μL/孔ji),实际配制时应duo配制100-200μL。使用前15分zhong,yi生物素化稀释襤e∈团ㄋ跎锼鼗?/span>(1:100)成gong作浓秖u5比帐褂谩Ⅻ/span>

5. 酶结he物gong作液:实验前ji算当次实验suo需用liang(yi100μL/孔ji),实际配制时应duo配制100-200μL。使用前15分zhong,yi酶结he物稀释襤e∈团ㄋ酎/span>HRP酶结he物(1:100)成gong作浓秖uⅫ/span>

当日使用。

人降钙素(CT)试剂盒标譲i废∈头椒ㄍ祭海▂i500μL/管为例,也可根ju实际用liang来稀蕋ing纥/span>200μL/管)

            

1. 在各孔中加入标譲i坊蜓鵳in各100μL 37℃孵育90分zhong

2. 加入100μ生物素化gong作液,37℃孵育60分zhong

3. xidi3

4. 加入100μL酶结he物gong作液, 37℃孵育30分zhong

5. xidi5

6. 加入90μL底物溶液, 37℃孵育15分zhong左右

7. 加入50μL终zhi液,li即在450nm波长处测liangOD

8. 结果ji算

一、操作因素duiELISA结果de影响ELISA操作步骤复杂,操作不当jiang引起絰i骴e误差。yi下叙述各个步骤中de影响因素。

1.加样

2.温育

3.xidi

4.显色

5.比色

er、灰区de设置通常情kuang下,ELISA定性实验yi“阳衴u焙汀耙跣yu崩幢ǜ娼峁秸遤ian有一条分界xian被称为“阳性判断值ao?/span>cut-off valueCO值),这是定性**测定结果报告de依ju。

三、标本复查ELISA手gong检测过程复杂,影响因素较duo,即使室nazhi控在控,也可能因孔jian差异而造成结果de差异,因此加大复查力度是bao证结果zhun确性de可靠方法,比如duiHBsAgHBeAgHCV-AbHIV-AbTP-Abdengxiang目de可yi、弱阳衴uan瓯炯吧偌鹠o式de检测结果进行复查。

四、结果判断和报告常用下列几种方法biao示结果:

1.定性测定

2.ban定liang测定 结果一般yidi度biao示。

3.定liang测定 即用已知liangde标譲i纷饕幌盗邢∈秃蠼宵/span>ELISA测定,绘制标zhun曲xian,结果yi优liangliang或单位biao示。在ELISA定liang检测中每一块反应板都必须绘制相应de标zhun曲xian。

注意事xiang:

仔细阅读说明书。

检查试剂盒标qian上de有效期。如果chao过有效期,qing勿使用。

an说明书确定suo有试剂齐全(shuliang、ti积)。

标本制备要规范,每份标本ti积要an2-3个复孔yi上deliang制备(贮存),尽liang分装做备份。短期na无法实验者,注意低温bao存。

zhun备好suo有实验额waisuo需物pin,(比如移液器,试管,qingxi器,酶标仪)。

an说明书jiangsuo用试剂平衡至室温,根ju检测标本shuliang确定suo需试剂deliang。

检查试剂盒na每謟hi约羋e贮存条件,bao证suo有试剂均an照试剂盒na说明书推荐de条件存储。

检查不稳定或者变zhide试剂溶液(比如沉dian或变色)。有些试糽i热绫曜ji废∈鸵夯蛘呒觳庀∈鸵海赡茉谏鑚i时就han有沉dian物。suo有试剂在di入酶标板之前,必需chong分混詑u6捎诔羋ian物de特性,在加入酶标板之前,必需不ting搅拌。

bao证chong分de孵育时jian和温秖uⅫ/span>

切勿使用不同生产pihaode试剂qu代蟴hong惺约粱蚧靐e蟴hong惺约痢Ⅻ/span>

在混he或溶jiedan白溶液蔮ao苊馀菽Ⅻ/span>

在实验开shi之前,癱ai藕檬笛閘iu程。

在实验开shi之前,qingjiegong作台。

若有问题,应与wo公si或代理商dejishuzhi持联系

人降钙素(CT)试剂盒结果判断:

1. 每个标譲i穌eOD值减qukong白孔deOD值后作图,如设置复孔,则应quqi平均值ji算。yi标譲i穌e浓度为横坐标,OD謉i葑辏娉霰陑hun曲xian。亦可yiOD謉i嶙辏曜ji穌e浓度为纵坐标,绘出标zhun曲xian。

2. 推荐使用专业de曲xian制作软件,如curve expert 1.31.4,在软件界面ji可根ju样pinOD值,由标zhun曲xian查出相应de浓度,乘yi稀释倍shu;亦可jiang样pindeOD值代入标zhun曲xiande拟he方程式,ji算出样苀angǘ龋瑉ai乘yi稀释倍shu,即为样pinde实际浓秖uⅫ/span>

3. 若样pinOD值高于标zhun曲xian上限,应shi当稀释后重测,ji算浓度时应乘yi稀释倍shu。 

降钙素(CT)试剂盒有效期稳定性考察

本试验yi降钙素(CT)为例

1.        OD值:

正常bao存条件下有效期na和chao过有效期2个yuesuo测OD值比较

正常有效期naOD值: 3.2512.8452.126, 1.859, 1.463, 1.022, 0.710, 0.08

chao过2个yue有效期OD值:3.1.7, 2.643, 2.125, 1.796, 1.453, 0.876, 0.432, 0.07

2.回收率:分别于定值血qing及血jiang中加入襤uan╨iangde降钙素(CT)标譲i罚馗床舛úi算qipin均值,回收率为测定謉i肜砺壑礵e比率。

        正常bao存条件下有效期na和过有效期2个yueelisa 试剂盒回收聅hi觳饨峁?/span>

Sample

Conditions

Recovery range(%)

Average(%)

Serum(n=6)

normal

88-106

95

After 12 month

80-100

87

EDTA plasma(n=6)

normal

88-106

97

After 12 month

78-98

87

 

3.       xian性:分别于定值血qing及血jiang中加入襤uan╨iangde降钙素(CT)标譲i罚iang标本an1:2,1:4,1:8稀蕋ing瑇ian性范围即为稀释后样本中降钙素(CT)hanliangde测定謉i肜砺壑礵e比率。

         正常bao存条件下有效期na和过有效期2个yueelisa 试剂盒回xian性检测结果

Sample

Conditions

1:2

1:4

1:8

Serum(n=6)

normal

81-92%

85-90%

89-105%

After 12month

80-88%

82-87%

87-101%

EDTA plasma(n=6)

normal

93-104%

81-97%

91-96%

After 12month

82-95%

75-82%

74-90%

 

4.        精密度:yi样pin测定值de变异系shuCVbiao示。CV%=SD/meanx100

pina差:qu同一pi次试剂盒dui低值,中值和高值样本进行定liang检测,每份样本测定20次,分别ji算不同浓度样本de平均值和SD值。

pijian差:选qu 3 个不同pi次de试剂盒分别dui低、中、高值定值样本进行定liang测定, 每个样本使用同一试剂盒重复测定 8 次,分别ji算不同浓度样本de平均值及 SD 值。(pina差: CV<10%;pijian差: CV<11%)

       正常bao存条件下有效期na和过有效期2个yueelisa 试剂盒回精密度检测结果

                    Intra-assay precision

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

16.68

14.22

70.25

62.36

369.75

327.88

SD

1.08

1.25

4.21

5.31

24.69

32.87

CV(%)

6.5

8.8

6.0

8.5

6.6

10

 

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

Sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

18.72

13.68

65.98

61.25

387.22

425.26

SD

1.45

1.52

4.83

5.18

28.49

36.87

CV%

7.7

11.1

7.3

8.5

7.3

8.7

人降钙素(CT)试剂盒会出现de问题及jie决办法:

1. 加入反应终zhi液后,没有吸光值或吸光值偏低。

a.原因:wei加入酶标记物。

jie决办法:qingan照操作步骤进行。

b.原因:试剂盒na容物wei能chong分回。

jie决办法:确定试剂盒na容物回温后zai进行操作。

c.原因:室温太低。

jie决办法:若室温太低(<19),qing于操作步骤4,shi当延长温育时jian。

d.原因:wei使用试剂盒deqingxi液qingxi。

jie决办法: qing用试剂盒nasuo提供deqingxi液qingxi。

e.原因:试剂盒已过有效期限。

jie决办法:qing更huan成仍在有效期限nade试剂盒。

2. 标zhun曲xianxian性不佳,或是平行性不好。

a.原因:温育位置避光不好或受到气liu干扰。

jie决办法: qing确认温育位置ji不透光也不透风(如抽tina)

b.原因:操作时jian拖太久。

jie决办法:qing在方法熟练后zai进行操作。

c.原因:微孔jian相互污染。

jie决办法: 加样pin蔮ao琿ing小xin勿溅出微孔wai,yi免造成qi它微孔de污染。

d.原因:标譲i坊蛎副昙俏飐uo加入deliang不一謑ongⅫ/span>

jie决办法:qing使用已校正过de移液枪,并确baoqi与吸头之jian有高度密he衴uⅫ/span>

e.原因:tian加样pin或试剂de操作方法不正确。

jie决办法:加样pin或试剂蔮ao穛ing勿jie触微孔。

f.原因:xi板过程fa生问题(如管路堵塞、xiwan板后weili刻进行下一步骤)

jie决办法:qing随时监控xi板机xi板过程,xiwan后li即进行下一步骤。

3. 吸光值均偏高(或xian性不筯uan伏/span>)

a.原因:室温太高(>25)

jie决办法: 若无法降低室na温度,qingshi当缩短步骤4de温育时jian。

b.原因:底物溶液受到污染。

jie决办法: 若fa现底物溶液已呈现淡蓝色,qing不要zai使用。

c.原因:反应时jianchao过太久。

jie决办法:qing控謕in从κ眏ian。

d.原因:酶标记物污染了盒naqi它试剂。

jie决办法:使用过de吸头应li即丢弃,可避免试剂jian相互污染,凡是试剂(特别蕅iao副昙俏镉氲孜锶芤裹/span>)jie触过de容器应li即qingxi干净。(先yipiao白水jin泡,zaiyiqing水冲xi干净,可确bao无残留)

4. 阴衴uan曜ji穌e吸光值低于阳衴uan曜ji穌e吸光值。

a.原因:微孔中de试剂wei能chong分混he。

jie决办法: 试糽iang觲an后,需轻qiao盘四周使qichong分混he均詑uⅫ/span>

b.原因:xi板过程fa生问题(2-f.)

jie决办法:qingcan考2-f.

c.原因:tian加样pin或酶标记物deliang不一謑ongⅫ/span>

jie决办法: qingcan考2-d.

 

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