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ren半胱氨酸蛋白酶抑制ji(CSTA)试ji盒

如果您dui该感兴qu的话,可以
名称: ren半胱氨酸蛋白酶抑制ji(CSTA)试ji盒
型号: CSTA
展商: ELISA试ji盒
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简单介绍

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ren半胱氨酸蛋白酶抑制ji(CSTA)试ji盒  的详细介绍


ren半胱氨酸蛋白酶抑制ji(CSTA)试ji盒

使用说ming书

ren半胱氨酸蛋白酶抑制ji(CSTA)试ji盒基ben原li:

ben试ji盒采用双夹心ELISAfa。用kangrenCSTA包被于酶biao板上,实验时样品或biao准苀en械膔enCSTA与包被结合,游离的chengfen被洗去。依次加入生物素化祄u箁enCSTA和纀ei齳ang化物酶biao记的亲和素。kangrenCSTA与结合在包被上的renCSTA结合、生物素与亲和素特异性结合而xingcheng**复合物,游离的chengfen被洗去。加入显色底物(TMB),TMB在纀ei齳ang化物酶的催化下呈xian蓝色,加终止液后变chenghuang色。用酶biaoyi在450nm波长处测OD值,renCSTA浓度与OD450值之间呈正比,通过绘制biao准曲线计算出样苀en衦enCSTA的浓秖uⅫ/span>

ren半胱氨酸蛋白酶抑制ji(CSTA)试ji盒描述:

英文名称 Human CSTA (Cystatin A)  ELISA Kit
謝ing拿劈/span> ren半胱氨酸蛋白酶抑制ji(CSTA)酶联**吸附测定试ji盒
货号 X-EL-H0147c 种属 Human/ren
规格 96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)
jian测fangfa 双夹心fa
jian测范wei 0.313~20ng/mL 灵敏度 0.188ng/mL

试ji盒zucheng:

謝ing拿劈/span>

英文名称

规格

保cun

  ELISA酶biao板(可拆卸)

  Micro ELISA  Plate(Dismountable)

  8×12 / 8×6*

4/-20 #

冻ganbiao准品

Reference Standard

  2/1 *

4/-20 #

biao准品&样品稀shi液

Reference Standard & Sample Diluent

  1 20mL/12mL*

4

浓suo生物素化

Concentrated Biotinylated Detection Ab

  1 120μL/70μL*

4/-20 #

生物素化稀shi液

Biotinytated Detection Ab Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓suoHRP酶结合物

Concentrated HRP Conjugate

  1 120μL/70μL*

4(避guang)

酶结合物稀shi液

HRP Conjugate Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓suo洗涤液(25×

ConcentratedWashBuffer (25×)

  1 30mL/16mL*

4

底物溶液(TMB

Substrate Reagent

  1 10mL/6mL*

4(避guang)

反应终止液

Stop Solution

  1 10mL/6mL*

4

封板覆膜

Plate Sealer

  5/3 zhang*

 

说ming书

Product  Description

  1 

 

质jianbaogao

Certificate of Analysis

  1 

 

特bie说ming
*: [96T/48T](da开包装后qing及时jian查所觴ing锲穝hi否齐quanwan整)
#: 
yi周内使用可cun于4℃,需长时间cun放或多次使用建议cun于-20.                                      

ren半胱氨酸蛋白酶抑制ji(CSTA)试ji盒jian测前准bei工作:

1. qingti前20fen钟从冰箱中qu出试ji盒,平heng至室温。

2. 将浓suo洗涤液用双蒸水稀shi(1:25)。wei用wan的放回4℃。从冰箱中qu出的浓suo洗涤液可能you结晶,属于正常xian象,可用40℃水浴微加热使结晶wanquan溶解后再配制洗涤液(加热温度不要超过50℃,使用时洗涤液应wei室温)。当ri使用。

3. biao准品10000×g离心1fen钟,加入biao准品&样品稀shi液1.0mL至冻ganbiao准苀en校艄躦ai,静zhi10fen钟,上下颠dao数次,待其充fen溶解后,用移液器将其轻轻hun匀(浓度wei8000pg/mL)。ran后根ju需要进行倍比稀shi(注:不要直接在反应kong中进行倍比稀shi)。建议配制cheng以下浓度:按zhao稀shifangfa图例 biao准品&样品稀shi液直接作weikong白kong0ng/mL。如配制5ng/mLbiao准品:qu0.5mL10ng/mL的上述biao准品加入含you0.5mLbiao准品&样品稀shi液的EP管中,hun匀即可,其余浓度依此类推。 

4. 生物素化工作液:实验前计算当次实验所需用量(以100μL/kong计),实ji配制时应多配制100-200μL。使用前15fen钟,以生物素化稀shi液稀shi浓suo生物素化(1:100)cheng工作浓秖u5眗i使用。

5. 酶结合物工作液:实验前计算当次实验所需用量(以100μL/kong计),实ji配制时应多配制100-200μL。使用前15fen钟,以酶结合物稀shi液稀shi浓suoHRP酶结合物(1:100)cheng工作浓秖uⅫ/span>

当ri使用。

ren半胱氨酸蛋白酶抑制ji(CSTA)试ji盒biao准品稀shifangfa图例:(以500μL/管wei例,也可根ju实ji用量来稀shi,如200μL/管)

            

1. 在各kong中加入biao准品或样品各100μL 37℃孵育90fen钟

2. 加入100μ生物素化工作液,37℃孵育60fen钟

3. 洗涤3

4. 加入100μL酶结合物工作液, 37℃孵育30fen钟

5. 洗涤5

6. 加入90μL底物溶液, 37℃孵育15fen钟左右

7. 加入50μL终止液,立即在450nm波长处测量OD

8. 结果计算

yi、cao作yin素duiELISA结果的影响ELISAcao作bu骤复za,cao作瞙uai苯鸾洗蟮奈蟛睢R韵滦鹗龈鞲鯾u骤中的影响yin素。

1.加样

2.温育

3.洗涤

4.显色

5.比色

二、粂i纳鑪hi通常qingkuang下,ELISA定性实验以“阳性”和“阴性”来baogao结果,两者间youyi条fenjie线被称wei“阳性pan秞ian怠保?/span>cut-off valueCO值),这shi定性**测定结果baogao的依ju。

三、biaoben复查ELISA手工jian测过程复za,影响yin素较多,即使室内质控在控,也可能yinkong间差异而zaocheng结果的差异,yin此加大复查力度shi保证结果准que性祄u煽縡angfa,比如duiHBsAgHBeAgHCV-AbHIV-AbTP-Ab等项mu祄u梢伞⑷跹粜詁iaoben及少见模式的jian测结果进行复查。

si、结果pan断和baogao常用下列几种fangfabiaoshi结果:

1.定性测定

2.半定量测定 结果yi般以滴度biaoshi。

3.定量测定 即用已知量的biao准品作yi系列稀shi后进行ELISA测定,绘制biao准曲线,结果襷a帕ji炕虻ノ籦iaoshi。在ELISA定量jian测中每yi块反应板都bixu绘制相应的biao准曲线。

注yi事项:

仔细阅du说ming书。

jian查试ji盒biao签上的youxiao期。如果超过youxiao期,qing勿使用。

按说ming书que定所you试ji齐quan(数量、体积)。

biaoben制bei要规范,每份biaoben体积要按2-3个复kong以上的量制bei(贮cun),尽量fen装做bei份。短期内wufa实验者,注yi低温保cun。

准bei好所you实验额wai所需物品,(比如移液器,试管,清洗器,酶biaoyi)。

按说ming书将所用试ji平heng至室温,根jujian测biaoben数量que定所需试ji的量。

jian查试ji盒内每种试ji的贮cun条jian,保证所you试ji均按zhao试ji盒内说ming书推荐的条jiancun储。

jian查不稳定或者变质的试ji溶液(比如沉淀或变色)。you些试ji,比如biao准品稀shi液或者jian测稀shi液,可能在设计蔮en秃瑈ou沉淀物。所you试ji在滴入酶biao板之前,bi需充fenhun詑u6鴜ou于沉淀物的特性,在加入酶biao板之前,bi需不停搅拌。

保证充fen的孵育时间和温秖uⅫ/span>

莤ing鹗褂貌煌鷆han批号的试jiqu代xianyou试ji或hun合xianyou试ji。

在hun合或溶解蛋白溶液时,避免pao沫chan生。

在实验开shi之前,安排好实验liu程。

在实验开shi之前,清洁工作tai。

若觴ing侍猓τ胛夜净虼鷏i商的糺i踔С至袋/span>

ren半胱氨酸蛋白酶抑制ji(CSTA)试ji盒结果pan断:

1. 每个biao准品的OD值减去kong白kong的OD值后作图,如设zhi复kong,则应qu其平均值计算。以biao准品的浓度wei横坐biao,OD值wei纵坐biao,绘出biao准曲线。亦可以OD值wei横坐biao,biao准品的浓度wei纵坐biao,绘出biao准曲线。

2. 推荐使用专业的曲线制作软jian,如curve expert 1.31.4,在软jianjie面既可根ju样品OD值,youbiao准曲线查出相应的浓度,乘以稀shi倍数;亦可将样品的OD值代入biao准曲线的ni合fang程式,计算出样品浓度,再乘以稀shi倍数,即wei样品的实ji浓秖uⅫ/span>

3. 若样品OD值高于biao准曲线上限,应适当稀shi后重测,计算浓度时应乘以稀shi倍数。 

ren半胱氨酸蛋白酶抑制ji(CSTA)试ji盒youxiao期稳定性kao察

ben试验以半胱氨酸蛋白酶抑制ji(CSTA)wei例

1.        OD值:

正常保cun条jian下youxiao期内和超过youxiao期2个yue所测OD值比较

正常youxiao期内OD值: 3.2512.8452.126, 1.859, 1.463, 1.022, 0.710, 0.08

超过2个yueyouxiao期OD值:3.1.7, 2.643, 2.125, 1.796, 1.453, 0.876, 0.432, 0.07

2.回收率:fenbie于定值血清及血jiang中加入yi定量的半胱氨酸蛋白酶抑制ji(CSTA)biao准品,重复测定并计算其品均值,回收率wei测定值与li论值的比率。

        正常保cun条jian下youxiao期内和过youxiao期2个yueelisa 试ji盒回收率jian测结果

Sample

Conditions

Recovery range(%)

Average(%)

Serum(n=6)

normal

88-106

95

After 12 month

80-100

87

EDTA plasma(n=6)

normal

88-106

97

After 12 month

78-98

87

 

3.       线性:fenbie于定值血清及血jiang中加入yi定量的半胱氨酸蛋白酶抑制ji(CSTA)biao准品,并将biaoben按1:2,1:4,1:8稀shi,线性范wei即wei稀shi后样ben中半胱氨酸蛋白酶抑制ji(CSTA)含量的测定值与li论值的比率。

         正常保cun条jian下youxiao期内和过youxiao期2个yueelisa 试ji盒回线性jian测结果

Sample

Conditions

1:2

1:4

1:8

Serum(n=6)

normal

81-92%

85-90%

89-105%

After 12month

80-88%

82-87%

87-101%

EDTA plasma(n=6)

normal

93-104%

81-97%

91-96%

After 12month

82-95%

75-82%

74-90%

 

4.        精密度:以样品测定值的变异系数CVbiaoshi。CV%=SD/meanx100

批内差:qu同yi批次试ji盒dui低值,中值和高值样ben进行定量jian测,每份样ben测定20次,fenbie计算不同浓度样ben的平均值和SD值。

批间差:xuanqu 3 个不同批次的试ji盒fenbiedui低、中、高值定值样ben进行定量测定, 每个样ben使用同yi试ji盒重复测定 8 次,fenbie计算不同浓度样ben的平均值及 SD 值。(批内差: CV<10%;批间差: CV<11%)

       正常保cun条jian下youxiao期内和过youxiao期2个yueelisa 试ji盒回精密度jian测结果

                    Intra-assay precision

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

16.68

14.22

70.25

62.36

369.75

327.88

SD

1.08

1.25

4.21

5.31

24.69

32.87

CV(%)

6.5

8.8

6.0

8.5

6.6

10

 

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

Sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

18.72

13.68

65.98

61.25

387.22

425.26

SD

1.45

1.52

4.83

5.18

28.49

36.87

CV%

7.7

11.1

7.3

8.5

7.3

8.7

ren半胱氨酸蛋白酶抑制ji(CSTA)试ji盒会出xian的问题及解决办fa:

1. 加入反应终止液后,没觴ing黦uang值或吸guang值偏低。

a.原yin:wei加入酶biao记物。

解决办fa:qing按zhaocao作bu骤进行。

b.原yin:试ji盒内容物wei能充fen回。

解决办fa:que定试ji盒内容物回温后再进行cao作。

c.原yin:室温太低。

解决办fa:若室温太低(<19),qing于cao作bu骤4,适当延长温育时间。

d.原yin:wei使用试ji盒的清洗液清洗。

解决办fa: qing用试ji盒内所ti供的清洗液清洗。

e.原yin:试ji盒已过youxiao期限。

解决办fa:qing更换chengreng在youxiao期限内的试ji盒。

2. biao准曲线线性不佳,或shi平行性不好。

a.原yin:温育位zhi避guang不好或shou到气liugan扰。

解决办fa: qingque认温育位zhi既不透guang也不透风(如抽屉内)

b.原yin:cao作时间拖太久。

解决办fa:qing在fangfa熟练后再进行cao作。

c.原yin:微kong间相hu污染。

解决办fa: 加样品时,qing小心勿溅出微kongwai,以免zaocheng其它微kong的污染。

d.原yin:biao准品或酶biao记物所加入的量不yizhi。

解决办fa:qing使用已校正过的移液枪,并que保其与吸蚮en鋣ou高度密合性。

e.原yin:tian加样品或试ji的cao作fangfa不正que。

解决办fa:加样品或试ji时,吸头qing勿接触微kong。

f.原yin:洗板过程发生问题(如管路堵塞、洗wan板后wei立刻进行下yibu骤)

解决办fa:qing随时监控洗板ji洗板过程,洗wan后立即进行下yibu骤。

3. 吸guang值均偏高(或线性不够dou)

a.原yin:室温太高(>25)

解决办fa: 若wufa降低室内温度,qing适当suo短bu骤4的温育时间。

b.原yin:底物溶液shou到污染。

解决办fa: 若发xian底物溶液已呈xian淡蓝色,qing不要再使用。

c.原yin:反应时间超过太久。

解决办fa:qing控制反应时间。

d.原yin:酶biao记物污染了盒内其它试ji。

解决办fa:使用过的吸头应立即丢弃,可避免试ji间相hu污染,凡shi试ji(特bie蕅iao竍iao记物与底物溶液)接触过的容器应立即清洗gan净。(xian以piao白水浸pao,再以清水冲洗gan净,可que保wucan留)

4. 阴性biao准品的吸guang值低于阳性biao准品的吸guang值。

a.原yin:微kong中的试jiwei能充fenhun合。

解决办fa: 试ji加wan后,需轻qiao盘si周使其充fenhun合均詑uⅫ/span>

b.原yin:洗板过程发生问题(2-f.)

解决办fa:qing参kao2-f.

c.原yin:tian加样品或酶biao记物的量不yizhi。

解决办fa: qing参kao2-d.

 

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