资liao

人脂蛋白a(LP-a)试剂he

如果您对竚ei行藂u的话,可以
名称: 人脂蛋白a(LP-a)试剂he
型号: LP-a
展商: ELISA试剂he
文档: 无相关文档

简单介绍

fun88备用网站


人脂蛋白a(LP-a)试剂he  的详细介绍


人脂蛋白a(LP-a)试剂he

shi用shuo明书

人脂蛋白a(LP-a)试剂he基本原理:

本试剂hecai用双夹xinELISA法。觤ei谷薒P-a包被于meibiao板上,实验时样品或biao准品zhong的人LP-ayu包被结合,you离的cheng穤hi粁i去。yi次加入生wu素化的抗人LP-a和辣根过氧化wumeibiao记的亲和素。抗人LP-ayu结合在包被蓌i娜薒P-a结合、生wu素yu亲和素特yi性结合而形cheng**复合wu,you离的cheng穤hi粁i去。加入显色底wu(TMB),TMB在辣根过氧化wumei的cui化xia呈现蓝色,加终止液后变cheng黄色。用meibiao仪在450nmbo长处测OD值,人LP-anong度yuOD450值之间呈正比,tong过hui制biao准曲xian计算chu样品zhong人LP-a的nong度。

人脂蛋白a(LP-a)试剂he描shu:

英文名称 Human LP-a (Lipoprotein a) ELISA Kit
zhong文名称 人脂蛋白a(LP-a)mei联**吸附测定试剂he
货号 X-EL-H0160c 种属 Human/人
规格 96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)
检测方法 双夹xin法
检测范wei 0.234~15ng/mL ling敏度 0.141ng/mL

试剂he组cheng:

zhong文名称

英文名称

规格

bao存

  ELISAmeibiao板(可拆卸)

  Micro ELISA  Plate(Dismountable)

  8×12 / 8×6*

4/-20 #

dong干biao准品

Reference Standard

  2/1 *

4/-20 #

biao准品&样品稀shi液

Reference Standard & Sample Diluent

  1 20mL/12mL*

4

nong缩生wu素化

Concentrated Biotinylated Detection Ab

  1 120μL/70μL*

4/-20 #

生wu素化稀shi液

Biotinytated Detection Ab Diluent

  1 10mL/6mL*

4

nong缩HRPmei结合wu

Concentrated HRP Conjugate

  1 120μL/70μL*

4(避guang)

mei结合wu稀shi液

HRP Conjugate Diluent

  1 10mL/6mL*

4

nong缩xidi液(25×

ConcentratedWashBuffer (25×)

  1 30mL/16mL*

4

底wurong液(TMB

Substrate Reagent

  1 10mL/6mL*

4(避guang)

穋ongχ罩挂裹/span>

Stop Solution

  1 10mL/6mL*

4

封板覆mo

Plate Sealer

  5/3 *

 

shuo明书

Product  Description

  1 

 

謘hi毂ǜ妩/span>

Certificate of Analysis

  1 

 

特别shuo明
*: [96T/48T](打kai包装后qingji时检查所有wu品是否齐quan完整)
#: 
一周内shi觤ei纱嬗冱/span>4℃,需长时间存放或多次shi用建议存于-20.                                      

人脂蛋白a(LP-a)试剂he检测qian准备工作:

1. qing提qian20分钟cong冰箱zhong取chu试剂he,平heng至室温。

2. 将nong缩xidi液用双蒸水稀shi(1:25)。蝐ong猛甑姆呕?/span>4℃。cong冰箱zhong取chu的nong缩xidi液可能有结晶,属于正常现象,可用40℃水yu微加reshi结晶完quanrong解后再配制xidi液(加re温度瞙ui?/span>50℃,shi用时xidi液应为室温)。当日shi用。

3. biao准品10000×g离xin1分钟,加入biao准品&样品稀shi液1.0mL至dong干biao准品zhong,旋jinguan盖,静置10分钟,上xiadian倒shu次,待其chong分rong解后,用移液qi将其轻轻hunyun(nong度为8000pg/mL)。然后根据需要进行倍比稀shi(注:瞙ui獄hi接在穋ong讂hong进行倍比稀shi)。建议配制cheng以xianong度:按zhao稀shi方法图例 biao准品&样品稀shi液zhi接作为空白孔0ng/mL。如配制5ng/mLbiao准品:取0.5mL10ng/mL的上shubiao准品加入含有0.5mLbiao准品&样品稀shi液的EPguanzhong,hunyun即可,其余nong度yi此类推。 

4. 生wu素化工作液:实验qian计算当次实验所需用量(以100μL/孔计),实际配制时应多配制100-200μL。shi觤en?/span>15分钟,以生wu素化稀shi液稀shinong缩生wu素化(1:100)cheng工作nong度。当日shi用。

5. mei结合wu工作液:实验qian计算当次实验所需用量(以100μL/孔计),实际配制时应多配制100-200μL。shi觤en?/span>15分钟,以mei结合wu稀shi液稀shinong缩HRPmei结合wu(1:100)cheng工作nong度。

当日shi用。

人脂蛋白a(LP-a)试剂hebiao准品稀shi方法图例:(以500μL/guan为例,也可根据实际用量来稀shi,如200μL/guan)

            

1. 在各孔zhong加入biao准品或样品各100μL 37℃孵yu90分钟

2. 加入100μ生wu素化工作液,37℃孵yu60分钟

3. xidi3

4. 加入100μLmei结合wu工作液, 37℃孵yu30分钟

5. xidi5

6. 加入90μL底wurong液, 37℃孵yu15分钟左右

7. 加入50μL终止液,li即在450nmbo长处测量OD

8. 结果计算

一、操作因素对ELISA结果的ying响ELISA操作步骤复杂,操作瞙uai苯鸾xi蟮奈蟛睢R詘ia叙shu各个步骤zhong的ying响因素。

1.加样

2.温yu

3.xidi

4.显色

5.比色

二、huiqu的设置tong常情况xia,ELISA定性实验襶u把粜yu焙汀耙跣yu崩幢ǜ娼峁秸呒溆幸惶醴纸鐇ian被称为“阳性判断值ao?/span>cut-off valueCO值),这是定性**测定结果报告的yi据。

三、biao本复查ELISA手工检测过程复杂,ying响因素较多,即shi室内质kong在kong,也可能因孔间差yi而zaocheng结果的差yi,因此加大复查li度是baozheng结果准确性的可靠方法,眗e缍狱/span>HBsAgHBeAgHCV-AbHIV-AbTP-Ab等项目的可yi、弱阳性biao本ji少见模蔶iang募觳饨峁懈床椤Ⅻ/span>

四、结果判断和报告常用xia列几謟hi椒ū韘hi结果:

1.定性测定

2.半定量测定 结果一般以滴度表shi。

3.定量测定 糲ong靡褄hi量的biao准品作一xi列稀shi后进行ELISA测定,hui制biao准曲xian,结果以you良量或单wei表shi。在ELISA定量检测zhongmei一块穋ongΠ宥急匦雋ui制相应的biao准曲xian。

注意shi项:

仔细阅读shuo明书。

检查试剂hebiao签蓌i挠行凇H绻行冢琿ing勿shi用。

按shuo明书确定所有试剂齐quan(shu量、tiji)。

biao本制备要规范,mei份biao本tiji要按2-3个复孔以蓌i牧恐票福ㄖ妫×糠肿白霰阜荨6唐谀谖薹ㄊ笛檎撸⒁獾臀耣ao存。

准备好所有实验额外所需wu品,(眗e缫埔簈i,试guan,qingxiqi,meibiao仪)。

按shuo明书将所用试剂平heng至室温,根据检测biao本shu量确定所需试剂的量。

检查试剂簒in趍ei种试剂的贮存条jian,baozheng所有试剂均按zhao试剂簒in趕huo明书推荐的条jian存chu。

检查不稳定或者变质的试剂rong液(眗e绯羋ian或变色)。有些试剂,眗e鏱iao准品稀shi液或者检测稀shi液,可能在设计时就含有沉dianwu。所有试剂在滴入meibiao板之qian,必需chong分hunyun。而由于沉dianwu的特性,在加入meibiao板之qian,必需不停jiao拌。

baozhengchong分的孵yu时间和温度。

切勿shi用不同生产批号的试剂取代现有试剂或hun合现有试剂。

在hun合或rong解蛋白rong液蔮ao躮ian泡沫产生。

在实验kaishi之qian,安排好实验流程。

在实验kaishi之qian,qing洁工作台。

若有问题,应yu我gong司或代理商的技术支持联xi

人脂蛋白a(LP-a)试剂he结果判断:

1. mei个biao准品的OD值减去空白孔的OD值后作图,如设謒ei纯祝蛴θ∑淦骄导扑恪R詁iao准品的nong度为横坐biao,OD值为纵坐biao,huichubiao准曲xian。yi可以OD值为横坐biao,biao准品的nong度为纵坐biao,huichubiao准曲xian。

2. 推荐shi用专ye的曲xian制作软jian,如curve expert 1.31.4,在软jian界mian既可根据样品OD值,由biao准曲xian查chu相应的nong度,乘以稀shi倍shuui嗫山返命/span>OD值代入biao准曲xian的ni合方程式,计算chu样品nong度,再乘以稀shi倍shu,即为样品的实际nong度。

3. 若样品OD值高于biao准曲xian上限,应适当稀shi后重测,计算nong度时应乘以稀shi倍shu。 

脂蛋白a(LP-a)试剂he有效期稳定性考察

本试验以脂蛋白a(LP-a)为例

1.        OD值:

正常bao存条jianxia有效期内和超过有效期2个月所测OD值比较

正常有效期内OD值: 3.2512.8452.126, 1.859, 1.463, 1.022, 0.710, 0.08

超过2个月有效期OD值:3.1.7, 2.643, 2.125, 1.796, 1.453, 0.876, 0.432, 0.07

2.回收率:穤hi鹩诙ㄖ笛猶ingji血浆zhong加入一定量的脂蛋白a(LP-a)biao准品,重复测定并计算其品均值,回收率为测定謉i肜砺壑档谋嚷省Ⅻ/span>

        正常bao存条jianxia有效期内和过有效期2个月elisa 试剂he回收聅hi觳饨峁?/span>

Sample

Conditions

Recovery range(%)

Average(%)

Serum(n=6)

normal

88-106

95

After 12 month

80-100

87

EDTA plasma(n=6)

normal

88-106

97

After 12 month

78-98

87

 

3.       xian性:穤hi鹩诙ㄖ笛猶ingji血浆zhong加入一定量的脂蛋白a(LP-a)biao准品,并将biao本按1:2,1:4,1:8稀shi,xian性范wei即为稀shi后样本zhong脂蛋白a(LP-a)含量的测定謉i肜砺壑档谋嚷省Ⅻ/span>

         正常bao存条jianxia有效期内和过有效期2个月elisa 试剂he回xian性检测结果

Sample

Conditions

1:2

1:4

1:8

Serum(n=6)

normal

81-92%

85-90%

89-105%

After 12month

80-88%

82-87%

87-101%

EDTA plasma(n=6)

normal

93-104%

81-97%

91-96%

After 12month

82-95%

75-82%

74-90%

 

4.        精密度:以样品测定值的变yixishuCV表shi。CV%=SD/meanx100

批内差:取同一批次试剂he对低值,zhong值和高值样本进行定量检测,mei份样本测定20次,穤hi鸺扑悴煌琻ong度样本的平均值和SD值。

批间差:选取 3 个不同批次的试剂he穤hi鸲缘汀hong、高值定值样本进行定量测定, mei个样本shi用同一试剂he重复测定 8 次,穤hi鸺扑悴煌琻ong度样本的平均值ji SD 值。(批内差: CV<10%;批间差: CV<11%)

       正常bao存条jianxia有效期内和过有效期2个月elisa 试剂he回精密度检测结果

                    Intra-assay precision

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

16.68

14.22

70.25

62.36

369.75

327.88

SD

1.08

1.25

4.21

5.31

24.69

32.87

CV(%)

6.5

8.8

6.0

8.5

6.6

10

 

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

Sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

18.72

13.68

65.98

61.25

387.22

425.26

SD

1.45

1.52

4.83

5.18

28.49

36.87

CV%

7.7

11.1

7.3

8.5

7.3

8.7

人脂蛋白a(LP-a)试剂hehuichu现的问题ji解决办法:

1. 加入穋ongχ罩挂汉螅挥形黦uang值或吸guang值偏低。

a.原因:未加入meibiao记wu。

解决办法:qing按zhao操作步骤进行。

b.原因:试剂簒in谌輜u未能chong分回。

解决办法:确定试剂簒in谌輜u回温后再进行操作。

c.原因:室温太低。

解决办法:若室温太低(<19),qing于操作步骤4,适当延长温yu时间。

d.原因:未shi用试剂he的qingxi液qingxi。

解决办法: qing用试剂簒in谒峁┑膓ingxi液qingxi。

e.原因:试剂he已过有效期限。

解决办法:qing更换cheng仍在有效期限内的试剂he。

2. biao准曲xianxian性不佳,或是平行性不好。

a.原因:温yuwei置避guang不好或受dao气流干扰。

解决办法: qing确认温yuwei置既不透guang也不透feng(如抽ti内)

b.原因:操作时间tuo太久。

解决办法:qing在方法熟练后再进行操作。

c.原因:微孔间相互污染。

解决办法: 加样品蔮ao琿ing小xin勿jianchu微孔外,以mianzaocheng其它微孔的污染。

d.原因:biao准品或meibiao记wu所加入的量瞙ui恢隆Ⅻ/span>

解决办法:qingshi用已校正过的移液枪,并确bao其yu吸头之间有高度密合衴uⅫ/span>

e.原因:tian加样品或试剂的操作方法不正确。

解决办法:加样品或试剂蔮ao穛ing勿接触微孔。

f.原因:xi板过程发生问题(如guan路dusai、xi完板后未like进行xia一步骤)

解决办法:qingsui时监kongxi板机xi板过程,xi完后li即进行xia一步骤。

3. 吸guang值均偏高(或xian性不够陡)

a.原因:室温太高(>25)

解决办法: 若无法jiang低室内温度,qing适当缩短步骤4的温yu时间。

b.原因:底wurong液受dao污染。

解决办法: 若发现底wurong液已呈现淡蓝色,qing瞙ui賡hi用。

c.原因:穋ongκ奔涑谩Ⅻ/span>

解决办法:qingkong制穋ongκ奔洹Ⅻ/span>

d.原因:meibiao记wu污染了簒in谄渌约痢Ⅻ/span>

解决办法:shi用过的吸头应li即ding弃,可避mian试剂间相互污染,凡是试剂(特别是meibiao记wuyu底wurong液)接触过的容qi应li即qingxi干净。(xian以piao白水浸泡,再以qing水冲xi干净,可确bao无残留)

4. 阴性biao准品的吸guang值低于阳性biao准品的吸guang值。

a.原因:微孔zhong的试剂未能chong分hun合。

解决办法: 试剂加完后,需轻敲盘四周shi其chong分hun合均yun。

b.原因:xi板过程发生问题(2-f.)

解决办法:qing参考2-f.

c.原因:tian加样品或meibiao记wu的量瞙ui恢隆Ⅻ/span>

解决办法: qing参考2-d.