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人5脂加yangmei(5-LO)试剂盒

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名称: 人5脂加yangmei(5-LO)试剂盒
型号: 5-LO
展商: ELISA试剂盒
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简单介绍

win007


人5脂加yangmei(5-LO)试剂盒  的详细介绍


人5脂加yangmei(5-LO)试剂盒

使用shuo明书

人5脂加yangmei(5-LO)试剂盒jiben原理:

ben试剂盒采用双夹xinELISA法。用kang人5-LObao被于mei标板上,shiyan时样品或标准品中的人5-LO与bao被结合,you离的成分被洗去。依次加入shengwu素hua的kang人5-LO和辣根过yanghuawumei标记的亲和素。kang人5-LO与结合在bao被上的人5-LO结簒ihengwu素与亲和素特yi性结合而形成**fu合wu,you离的成分被洗去。加入显色底wu(TMB),TMB在辣根过yanghuawumei的催huaxia呈现蓝色,加终止液后变成黄色。用mei标仪在450nmbochangchu测OD值,人5-LO浓du与OD450值zhi间呈正比,通过绘zhi标准曲xian计算出样品中人5-LO的浓秖uⅫ/span>

人5脂加yangmei(5-LO)试剂盒描述:

ying文名称 Human 5-LO (Arachidonate 5-Lipoxygenase) ELISA Kit
中文名称 人5脂加yangmei(5-LO)mei联**吸附测ding试剂盒
货号 X-EL-H0223c 种属 Human/人
规格 96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)
检测方法 双夹xin法
检测fanwei 0.156~10ng/mL 灵敏du 0.094ng/mL

人5脂加yangmei(5-LO)试剂盒组成:

中文名称

ying文名称

规格

保存

  ELISAmei标板(可拆卸)

  Micro ELISA  Plate(Dismountable)

  8×12 / 8×6*

4/-20 #

dong干标准品

Reference Standard

  2/1 *

4/-20 #

标准品&样品xishi液

Reference Standard & Sample Diluent

  1 20mL/12mL*

4

浓缩shengwu素hua

Concentrated Biotinylated Detection Ab

  1 120μL/70μL*

4/-20 #

shengwu素huaxishi液

Biotinytated Detection Ab Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩HRPmei结合wu

Concentrated HRP Conjugate

  1 120μL/70μL*

4(避光)

mei结合wuxishi液

HRP Conjugate Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩洗涤液(25×

ConcentratedWashBuffer (25×)

  1 30mL/16mL*

4

底wu溶液(TMB

Substrate Reagent

  1 10mL/6mL*

4(避光)

反应终止液

Stop Solution

  1 10mL/6mL*

4

封板fu膜

Plate Sealer

  5/3 *

 

shuo明书

Product  Description

  1 fen

 

謘hi靊ao告

Certificate of Analysis

  1 fen

 

特bieshuo明
*: [96T/48T](da开bao装后qingji时检查所有wu品是fuqi全完整)
#: 
yi周内使用可存于4℃,需chang时间存fang或多次使用建议存于-20.                                      

人5脂加yangmei(5-LO)试剂盒检测qian准备工作:

1. qing提qian20分钟从冰箱中qu出试剂盒,平衡至室温。

2. jiang浓缩洗涤液用双蒸水xishi(1:25)。未用完的fang回4℃。从冰箱中qu出的浓缩洗涤液可能有结晶,属于正常现象,可用40℃水浴微加热使结晶完全溶解后再peizhi洗涤液(加热温du不yao超过50℃,使用时洗涤液应为室温)。当日使用。

3. 标准品10000×g离xin1分钟,加入标准品&样品xishi液1.0mL至dong干标准品中,旋紧管盖,静置10分钟,上xia颠倒shu次,待其chong分溶解后,用移液qijiang其轻轻混匀(浓du为8000pg/mL)。然后根据需yaojin行倍比xishi(注:不yao直接在反应孔中jin行倍比xishi)。建议peizhi成以xia浓du:按zhaoxishi方法图例 标准品&样品xishi液直接作为空白孔0ng/mL。如peizhi5ng/mL标准品:qu0.5mL10ng/mL的上述标准品加入han有0.5mL标准品&样品xishi液的EP管中,混匀即可,其余浓du依ci类推。 

4. shengwu素hua工作液:shiyanqian计算当次shiyan所需用量(以100μL/孔计),shijipeizhi时应多peizhi100-200μL。使用qian15分钟,以shengwu素huaxishi液xishi浓缩shengwu素hua(1:100)成工作浓秖u5比帐褂谩Ⅻ/span>

5. mei结合wu工作液:shiyanqian计算当次shiyan所需用量(以100μL/孔计),shijipeizhi时应多peizhi100-200μL。使用qian15分钟,以mei结合wuxishi液xishi浓缩HRPmei结合wu(1:100)成工作浓秖uⅫ/span>

当日使用。

人5脂加yangmei(5-LO)试剂盒标准品xishi方法图例:(以500μL/管为例,也可根据shiji用量来xishi,如200μL/管)

            

1. 在ge孔中加入标准品或样品ge100μL 37℃孵yu90分钟

2. 加入100μshengwu素hua工作液,37℃孵yu60分钟

3. 洗涤3

4. 加入100μLmei结合wu工作液, 37℃孵yu30分钟

5. 洗涤5

6. 加入90μL底wu溶液, 37℃孵yu15分钟左右

7. 加入50μL终止液,立即在450nmbochangchu测量OD

8. 结果计算

yi、操作yin素对ELISA结果的影响ELISA操作步zhoufu杂,操作瞙uai眏iang引起jiao大的误差。以xia叙述ge个步zhou中的影响yin素。

1.加样

2.温yu

3.洗涤

4.显色

5.比色

er、灰区的设置通常情况xia,ELISAding性shiyan以“阳性”和“yin性”来bao告结果,两者间有yi条分界xian被称为“阳性判duan值”(cut-off valueCO值),zhe是ding性**测ding结果bao告的依据。

三、标benfu查ELISA手工检测过程fu杂,影响yin素jiao多,即使室内质控在控,也可能yin孔间差yi而造成结果的差yi,yinci加大fu查lidu是保证结果譲i沸缘目蒶ao方法,比如对HBsAgHBeAgHCV-AbHIV-AbTP-Ab等xiang目的可疑、ruo阳性标benji少见mo式的检测结果jin行fu查。

si、结果判duan和bao告常用xia列几种方法表示结果:

1.ding性测ding

2.半ding量测ding 结果yi般以滴du表示。

3.ding量测ding 即用已知量的标准品作yi系列xishi后jin行ELISA测ding,绘zhi标准曲xian,结果以优良量或单位表示。在ELISAding量检测中每yi块反应板都必须绘zhi相应的标准曲xian。

注意事xiang:

仔细阅秎iao得魇椤Ⅻ/span>

检查试剂盒标签上的有效期。如果超过有效期,qing勿使用。

癱i得魇槿穌ing所有试剂qi全(shu量、体积)。

标benzhi备yao规fan,每fen标ben体积yao按2-3个fu孔以上的量zhi备(贮存),尽量分装做备fen。短期内无法shiyan者,注意低温保存。

准备好所有shiyan额外所需wu品,(比如移液qi,试管,qing洗qi,mei标仪)。

癱i得魇閖iang所用试剂平衡至室温,根据检测标benshu量确ding所需试剂的量。

检查试剂簒in诿恐质约恋闹嫣跫Vに惺约羓un按zhao试剂簒in趕huo明书推荐的条件存储。

检查不wending或者变謘hi氖约寥芤海ū热绯恋砘虮渖S行┦约粒热绫曜计穢ishi液或者检测xishi液,可能在设计蔮en蚳an有沉淀wu。所有试剂在祑en雖ei标板zhiqian,必需chong分混詑u6捎诔恋韜u的特性,在加入mei标板zhiqian,必需不停jiaoban。

保证chong分的孵yu时间和温秖uⅫ/span>

切勿使用不同sheng产pi号的试剂qu代现有试剂或混合现有试剂。

在混合或溶解dan白溶液时,避mian泡mo产sheng。

在shiyan开shizhiqian,安排好shiyan流程。

在shiyan开shizhiqian,qing洁工作台。

若有问题,应与wo公si或代理商的糺i踔С至袋/span>

结果判duan:

1. 每个标准品的OD值减去空白孔的OD值后作图,如设置fu孔,则应qu其平jun值计算。以标准品的浓du为heng坐标,OD值为纵坐标,绘出标准曲xian。亦可以OD值为heng坐标,标准品的浓du为纵坐标,绘出标准曲xian。

2. 推荐使用专业的曲xianzhi作ruan件,如curve expert 1.31.4,在ruan件界面ji可根据样品OD值,由标准曲xian查出相应的浓du,乘以xishi倍shu;亦可jiang样品的OD值代入标准曲xian的拟合方程式,计算出样苀ang╠u,再乘以xishi倍shu,即为样品的shiji浓秖uⅫ/span>

3. 若样品OD值高于标准曲xian上限,应蕇hi眡ishi后重测,计算浓du时应乘以xishi倍shu。 

5脂加yangmei(5-LO)试剂盒有效期wending性考察

ben试yan以5脂加yangmei(5-LO)为例

1.        OD值:

正常保存条件xia有效期内和超过有效期2个月所测OD值比jiao

正常有效期内OD值: 3.2512.8452.126, 1.859, 1.463, 1.022, 0.710, 0.08

超过2个月有效期OD值:3.1.7, 2.643, 2.125, 1.796, 1.453, 0.876, 0.432, 0.07

2.回收率:分bie于ding值xueqingjixue浆中加入yiding量的5脂加yangmei(5-LO)标准品,重fu测ding并计算其品jun值,回收率为测ding值与理论值的比率。

        正常保存条件xia有效期内和过有效期2个月elisa 试剂盒回收聅hi觳饨峁?/span>

Sample

Conditions

Recovery range(%)

Average(%)

Serum(n=6)

normal

88-106

95

After 12 month

80-100

87

EDTA plasma(n=6)

normal

88-106

97

After 12 month

78-98

87

 

3.       xian性:分bie于ding值xueqingjixue浆中加入yiding量的5脂加yangmei(5-LO)标准品,并jiang标ben按1:2,1:4,1:8xishi,xian性fanwei即为xishi后样ben中5脂加yangmei(5-LO)han量的测ding值与理论值的比率。

         正常保存条件xia有效期内和过有效期2个月elisa 试剂盒回xian性检测结果

Sample

Conditions

1:2

1:4

1:8

Serum(n=6)

normal

81-92%

85-90%

89-105%

After 12month

80-88%

82-87%

87-101%

EDTA plasma(n=6)

normal

93-104%

81-97%

91-96%

After 12month

82-95%

75-82%

74-90%

 

4.        精密du:以样品测ding值的变yi系shuCV表示。CV%=SD/meanx100

pi内差:qu同yipi次试剂盒对低值,中值和高值样benjin行ding量检测,每fen样ben测ding20次,分bie计算不同浓du样ben的平jun值和SD值。

pi间差:xuanqu 3 个不同pi次的试剂盒分bie对低、中、高值ding值样benjin行ding量测ding, 每个样ben使用同yi试剂盒重fu测ding 8 次,分bie计算不同浓du样ben的平jun值ji SD 值。(pi内差: CV<10%;pi间差: CV<11%)

       正常保存条件xia有效期内和过有效期2个月elisa 试剂盒回精密du检测结果

                    Intra-assay precision

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

16.68

14.22

70.25

62.36

369.75

327.88

SD

1.08

1.25

4.21

5.31

24.69

32.87

CV(%)

6.5

8.8

6.0

8.5

6.6

10

 

Conditions

normal

After 12month

normal

After 12month

normal

After 12month

Sample

1

1

2

2

3

3

n

20

20

20

20

20

20

Mean(ng/ml)

18.72

13.68

65.98

61.25

387.22

425.26

SD

1.45

1.52

4.83

5.18

28.49

36.87

CV%

7.7

11.1

7.3

8.5

7.3

8.7

人5脂加yangmei(5-LO)试剂盒会出现的问题ji解决办法:

1. 加入反应终止液后,没有吸光值或吸光值偏低。

a.原yin:未加入mei标记wu。

解决办法:qing按zhao操作步zhoujin行。

b.原yin:试剂簒in谌輜u未能chong分回。

解决办法:确ding试剂簒in谌輜u回温后再jin行操作。

c.原yin:室温太低。

解决办法:若室温太低(<19),qing于操作步zhou4,蕇hi毖觕hang温yu时间。

d.原yin:未使用试剂盒的qing洗液qing洗。

解决办法: qing用试剂簒in谒峁┑膓ing洗液qing洗。

e.原yin:试剂盒已过有效期限。

解决办法:qing更huan成仍在有效期限内的试剂盒。

2. 标准曲xianxian性不佳,或是平行性不好。

a.原yin:温yu位置避光不好或受到qi流干扰。

解决办法: qing确认温yu位置ji不透光也不透feng(如抽屉内)

b.原yin:操作时间拖太久。

解决办法:qing在方法shu练后再jin行操作。

c.原yin:微孔间相互wu染。

解决办法: 加样品时,qing小xin勿溅出微孔外,以mian造成其它微孔的wu染。

d.原yin:标准品或mei标记wu所加入的量不yi致。

解决办法:qing使用已校正过的移液枪,并确保其与吸头zhi间有高du密合性。

e.原yin:tian加样品或试剂的操作方法不正确。

解决办法:加样品或试剂时,吸头qing勿接chu微孔。

f.原yin:洗板过程发sheng问题(如管路dusai、洗完板后未立刻jin行xiayi步zhou)

解决办法:qing随时jian控洗板ji洗板过程,洗完后立即jin行xiayi步zhou。

3. 吸光值jun偏高(或xian性不够陡)

a.原yin:室温太高(>25)

解决办法: 若无法降低室内温du,qing蕇hi彼醵滩絲hou4的温yu时间。

b.原yin:底wu溶液受到wu染。

解决办法: 若发现底wu溶液已呈现dan蓝色,qing不yao再使用。

c.原yin:反应时间超过太久。

解决办法:qing控zhi反应时间。

d.原yin:mei标记wuwu染liao簒in谄渌约痢Ⅻ/span>

解决办法:使用过的吸头应立即丢弃,可避mian试剂间相互wu染,凡是试剂(特bie是mei标记wu与底wu溶液)接chu过的容qi应立即qing洗干净。(先以piao白水浸泡,再以qing水冲洗干净,可确保无残liu)

4. yin性标准品的吸光值低于阳性标准品的吸光值。

a.原yin:微孔中的试剂未能chong分混簒iⅫ/span>

解决办法: 试剂加完后,需轻敲盘si周使其chong分混合jun詑uⅫ/span>

b.原yin:洗板过程发sheng问题(2-f.)

解决办法:qing参考2-f.

c.原yin:tian加样品或mei标记wu的量不yi致。

解决办法: qing参考2-d.

 

liu言
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