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大shu钙/钙调素依赖性蛋皕hunei2(CAMK2)mei联免yi吸附jian测shi剂盒

如果您对竚ei行巳さ幕?可以
名称: 大shu钙/钙调素依赖性蛋皕hunei2(CAMK2)mei联免yi吸附jian测shi剂盒
型号: CAMK2
展商: ELISAshi剂盒
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简单介绍

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大shu钙/钙调素依赖性蛋皕hunei2(CAMK2)mei联免yi吸附jian测shi剂盒  的详细介绍

大shu钙/钙调素依赖性蛋皕hunei2(CAMK2)mei联**吸附jian测shi剂盒

shiyong说明书

yu期应yong

本shi剂盒运yong双夹xinELISAfa定量测定大shu血qing、血jiang、组zhi匀jiang、细胞裂解ye、细胞培yang上qingye和其他生wuye体中钙/钙调素依赖性蛋皕hunei2(CAMK2)含量。

大shu钙/钙调素依赖性蛋皕hunei2(CAMK2)mei联**吸附jian测shi剂盒基本原理:

本shi剂盒采yong双夹xinELISAfa。yong抗大shu钙/钙调素依赖性蛋皕hunei2(CAMK2)bao被于mei标板上,实验时yang品huo标譲i分械拇髎hu钙/钙调素依赖性蛋皕hunei2(CAMK2)与bao被结合,you离的成穤hi粁i去。依次加入生wu素化的抗大shu钙/钙调素依赖性蛋皕hunei2(CAMK2)和辣根过氧化wumei标记的亲和素。抗大shu钙/钙调素依赖性蛋皕hunei2(CAMK2)与结簒ian赽ao被上的大shu钙/钙调素依赖性蛋皕hunei2(CAMK2)结合、生wu素与亲和素特异性结合而形成**复合wu,you离的成穤hi粁i去。加入xian色diwu(TMB),TMB在辣根过氧化wumei的催化下cheng现蓝色,加终止ye后变成黄色。yongmei标仪在450nm波长处测ODzhi,大shu钙/钙调素依赖性蛋皕hunei2(CAMK2)浓度与OD450zhi之间cheng正比,tong过绘制标zhun曲线ji算chuyang品中大shu钙/钙调素依赖性蛋皕hunei2(CAMK2)的浓度。

描shu:

英文名称 Rat CAMK2 (Calcium/Calmodulin-Dependent Protein Kinase-Ⅱ) ELISA Kit
中文名称 大shu钙/钙调素依赖性蛋皕hunei2(CAMK2)mei联**吸附测定shi剂盒
货号 X-EL-R0138c 謟hi簏/span> Rat/大shu
guige 96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)
jian测方fa 双夹xinfa
jian测范围 15.625~1000pg/mL ling敏度 9.375pg/mL

成:

中文名称

英文名称

guige

保存

  ELISAmei标板(可chai卸)

  Micro ELISA  Plate(Dismountable)

  8×12 / 8×6*

4/-20 #

冻干标譲i饵/span>

Reference Standard

  2/1 *

4/-20 #

标譲i饵/span>&yang品稀释ye

Reference Standard & Sample Diluent

  1 20mL/12mL*

4

浓缩生wu素化

Concentrated Biotinylated Detection Ab

  1 120μL/70μL*

4/-20 #

生wu素化稀释ye

Biotinytated Detection Ab Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩HRPmei结合wu

Concentrated HRP Conjugate

  1 120μL/70μL*

4(避光)

mei结合wu稀释ye

HRP Conjugate Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩xidiye(25×

ConcentratedWashBuffer (25×)

  1 30mL/16mL*

4

diwu溶ye(TMB

Substrate Reagent

  1 10mL/6mL*

4(避光)

反应终止ye

Stop Solution

  1 10mL/6mL*

4

feng板覆膜

Plate Sealer

  5/3 *

 

说明书

Product  Description

  1 

 

zhijian报告

Certificate of Analysis

  1 

 

特别说明
*: [96T/48T](打开bao装后请ji时jian查suo有wu品是否齐全完整)
#: 
一zhou内shiyong可存于4℃,需长时间存放huo多次shiyong建议存于-20.                                      

大shu钙/钙调素依赖性蛋皕hunei2(CAMK2)mei联**吸附jian测shi剂盒jian测前zhun备工作:

1. 请提前20分钟从冰箱中取chushi剂盒,平衡至室蝜ong

2. jiang浓缩xidiyeyong双zheng水稀释(1:25)。未yong完的放回4℃。从冰箱中取chu的浓缩xidiye可neng有结晶,属于正常现象,可yong40℃水浴微加热shi结晶完全溶解后再配制xidiye(加热温度不yao超过50℃,shiyong时xidiye应为室温)。当日shiyong。

3. 标譲i耳 于10000×g离xin1分钟,加入标譲i?amp;yang品稀释ye1.0mL至冻干标譲i分校瑇uan紧guan盖,静置10分钟,上下diandao数次,待其充分溶解后,yong移yeqijiang其轻轻混匀(浓度为1000pg/mL)。然后根据需yaojin行倍比稀释(注:不yaozhi接在反应孔中jin行倍比稀释)。建议配制成以下浓度:按照稀释方fa图例 标譲i?amp;yang品稀释yezhi接作为空bai孔0ng/mL。如配制5ng/mL标譲i罚喝?.5mL10ng/mL的上shu标譲i芳尤牒?.5mL标譲i?amp;yang品稀释ye的EPguan中,混匀即可,其余浓度依此类推。 

4. 生wu素化工作ye:实验前ji算当次实验suo需yong量(以100μL/孔ji),实际配制时应多配制100-200μL。shi觤en?5分钟,以生wu素化稀释ye稀释浓缩生wu素化(1:100)成工作浓度。当日shiyong。

5. mei结合wu工作ye:实验前ji算当次实验suo需yong量(以100μL/孔ji),实际配制时应多配制100-200μL。shi觤en?5分钟,以mei结合wu稀释ye稀释浓缩HRPmei结合wu(1:100)成工作浓度。

当日shiyong。

大shu钙/钙调素依赖性蛋皕hunei2(CAMK2)mei联**吸附jian测shi剂盒标譲i废∈头絝a图例:(以500μL/guan为例,也可根据实际yong量来稀释,如200μL/guan)

1.shi觤en癹iangsuo有的shi剂和标本缓慢均衡至室温(18-25oC),shi剂不nengzhi接在37oC溶解。

2.标譲i饵span>(冻干品):每瓶标譲i芳尤氡曜ji废∈蛓e1mL,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复diandao/搓动以zhu溶解,其浓度为1000pg/mL。zhun备7个稀释标譲i返命span>EPguan,每个EPguan中加入500μL的标譲i废∈蛓e,如图suoshi依次倍比稀释,标譲i废∈蛓e(0pg/mL)zhi接作为空bai孔。为保证实验结果有效性,胟an问笛榍雜hiyong新的标譲i啡躽e。

      

1. 在各孔中加入标譲i穐uoyang品各100μL, 37℃fu育90分钟

2. 加入100μL 生wu素化工作ye,37℃fu育60分钟

3. xidi3次

4. 加入100μLmei结合wu工作ye, 37℃fu育30分钟

5. xidi5次

6. 加入90μLdiwu溶ye, 37℃fu育15分钟zuoyou

7. 加入50μL终止ye,立即在450nm波长处测量ODzhi

8. 结果ji算

一、操作因素对ELISA结果的影响ELISA操作步骤复杂,操作瞙uai眏iang引qi絰i蟮奈蟛睢R韵滦餾hu各个步骤中的影响因素。

1.加yang

2.温育

3.xidi

4.xian色

5.比色

er、灰区的设置tong常qing况下,ELISA定性实验以“yang性”和“阴性”来报告结果,两者间有一条分界线被称为“yang性判duanzhi”(cut-off value,COzhi),这是定性**测定结果报告的依据。

三、标本复查ELISAshou工jian测过程复杂,影响因素较多,即shi室内zhikong在kong,也可neng因縵hun洳钜於斐山峁牟钜欤虼思哟蟾床榱Χ仁潜Vそ峁鹺hun确性的可靠方fa,比如对HBsAg、HBeAg、HCV-Ab、HIV-Ab、TP-Ab等项目的可疑、弱yang性标本ji少jian模式的jian测结果jin行复查。

四、结果判duan和报告常yong下列几謟hi絝a表shi结果:

1.定性测定

2.半定量测定 结果一般以di度表shi。

3.定量测定 即yong已知量的标譲i纷饕幌盗邢∈秃骿in行ELISA测定,绘制标zhun曲线,结果以youliang量huo单位表shi。在ELISA定量jian测中每一kuai反应板都必须绘制相应的标zhun曲线。

大shu钙/钙调素依赖性蛋皕hunei2(CAMK2)mei联**吸附jian测shi剂盒会chu蟴hi奈侍鈐i解决banfa:

1. 加入反应终止ye后,没有吸光zhihuo吸光zhi偏低。

a.原因:未加入mei标记wu。

解决banfa:请按照操作步骤jin衳iao

b.原因:shi剂簒in谌輜u未neng充分回。

解决banfa:确定shi剂簒in谌輜u回温后再jin行操作。

c.原因:室温太低。

解决banfa:若室温太低(<19℃),请于操作步骤4,shi当延长温育时间。

d.原因:未shiyongshi剂盒的qingxiyeqingxi。

解决banfa: 请yongshi剂簒in趕uo提供的qingxiyeqingxi。

e.原因:shi剂盒已过有效期xian。

解决banfa:请更换成仍在有效期xian内的shi剂簒iao

2. 标zhun曲线线性不佳,huo是平行性不好。

a.原因:温育位置避光不好huo受到气流干扰。

解决banfa: 请确认温育位置既不tou光也不tou风(如chou屉内)。

b.原因:操作时间tuo太久。

解决banfa:请在方fa熟练后再jin行操作。

c.原因:微縵hun湎嗷u染。

解决banfa: 加yang品时,请xiaoxin勿溅chu微孔wai,以免造成其ta微孔的wu染。

d.原因:标譲i穐uomei标记wusuo加入的量不一謑ong

解决banfa:请shiyong已校正过的移ye枪,并确保其与吸头之间有高度mi合性。

e.原因:添加yang品huoshi剂的操作方fa不正确。

解决banfa:加yang品huoshi剂时,吸头请勿接触微孔。

f.原因:xi板过程发生问题(如guanludu塞、xi完板后未立刻jin行下一步骤)。

解决banfa:请随时监kongxi板机xi板过程,xi完后立即jin行下一步骤。

3. 吸光zhi均偏高(huo线性不够陡)。

a.原因:室温太高(>25℃)。

解决banfa: 若无fa降低室内温度,请shi当缩短步骤4的温育时间。

b.原因:diwu溶ye受到wu染。

解决banfa: 若发现diwu溶ye已cheng蟴hi渡氩粂ao再shiyong。

c.原因:反应时间超过太久。

解决banfa:请kong制反应时间。

d.原因:mei标记wuwu染liao簒in谄鋞ashi剂。

解决banfa:shiyong过的吸头应立即丢qi,可避免shi糽iang湎嗷u染,fan是shi剂(特别是mei标记wu与diwu溶ye)接触过的容qi应立即qingxi干净。(先以漂bai水jin泡,再以qing水冲xi干净,可确保无残留)

4. 阴性标譲i返奈鈠hi低于yang性标譲i返奈鈠hi。

a.原因:微孔中的shi剂未neng充分混合。

解决banfa: shi糽iang油旰螅枨崆门趟膠houshi其充分混合均匀。

b.原因:xi板过程发生问题(同2-f.)。

解决banfa:请参kao2-f.

c.原因:添加yang品huomei标记wu的量不一謑ong

解决banfa: 请参kao2-d.

注yi事项:

A 仔细阅秎iao得魇椤

B jian查shi剂盒标签上的有效期。如果超过有效期,请勿shiyong。

C 按说明书确定suo有shi剂齐全(数量、体积)。

D 标本制备yaogui范,每份标本体积yao按2-3个复孔以上的量制备(zhu存),尽量分譩ai霰阜荨6唐谀谖辠a实验者,注yi低温保存。

E zhun备好suo有实验额waisuo需wu品,(比如移yeqi,shiguan,qingxiqi,mei标仪)。

F 按说明书jiangsuoyongshi剂平衡至室温,根据jian测标本数量确定suo需shi剂的量。

G jian查shi剂簒in诿恐謘hi剂的zhu存条jian,保证suo有shi剂均按照shi剂簒in谒得魇橥苆ian的条jian存储。

H jian查不稳定huo者变zhi的shi剂溶ye(比如沉淀huo变色)。有些shi糽i热绫曜ji废∈蛓ehuo者jian测稀释ye,可neng在设ji时jiu含有沉淀wu。suo有shi剂在di入mei标板之前,必需充分混匀。而由于沉淀wu的特性,在加入mei标板之前,必需不停jiao拌。

I 保证充穤hi膄u育时间和温度。

J 切勿shiyong不同生产批号的shi剂取代现有shi剂huo混合现有shi剂。

K 在混合huo溶解蛋bai溶ye时,避免泡沫产生。

L 在实验开shi之前,安排好实验流程。

M 在实验开shi之前,qing洁工作台。

N 若有问题,应与我公司huo代理商的技术支chi联系

大shu钙/钙调素依赖性蛋皕hunei2(CAMK2)mei联**吸附jian测shi剂盒结果判duan:

1. 每个标譲i返腛Dzhi减去空bai孔的ODzhi后作图,如设謒ei纯祝蛴θ∑淦骄鵽hiji算。以标譲i返呐ǘ任嶙辏琌D謉i葑辏鎐hu标zhun曲线。亦可以OD謉i嶙辏曜ji返呐ǘ任葑辏鎐hu标zhun曲线。

2. 推jianshiyong专业的曲线制作ruanjian,如curve expert 1.3huo1.4,在ruanjian界面既可根据yang品ODzhi,由标zhun曲线查chu相应的浓度,乘以稀释倍数;亦可jiangyang品的ODzhi代入标zhun曲线的ni合方程式,ji算chuyang品浓度,再乘以稀释倍数,即为yang品的实际浓度。

3. 若yang品ODzhi高于标zhun曲线上xian,应shi当稀释后zhong测,ji算浓度时应乘以稀释倍数。

 特异性:

本shi剂盒yong于jian测大shu钙/钙调素依赖性蛋皕hunei2(CAMK2),经jian测与其ta相似wuzhi无明xianjiao叉反应。

由于受到技术jiyang本来yuan的xian制,不可neng完成对suo有相关huo相似wuzhijiao叉反应jian测,因此本shi剂盒有可neng与未经jian测的其tawuzhi有jiao叉反应。

回收率:

穤hi鹩诙▃hi血qingji血jiangyang本中加入一定量的大shu钙/钙调素依赖性蛋皕hunei2(CAMK2)(加标yang品),zhong复测定并ji算其均zhi,回收率为测定謉i肜砺踷hi的比率

线性:

在定zhi血qingji血jiangyang本内加入shi量的大shu钙/钙调素依赖性蛋皕hunei2(CAMK2),并倍比稀释成 1:21:41:81:16 的待测yang本,线性范围即为稀释后yang本中大shu钙/钙调素依赖性蛋皕hunei2(CAMK2)含量的测定謉i肜砺踷hi的比率。


大shu钙/钙调素依赖性蛋皕hunei2(CAMK2)mei联**吸附jian测shi剂盒精mi度:

精mi度yongyang苀an舛▃hi的变异系数 CV 表shi。CV(%) = SD/mean×100

批内差:取同批次shi剂盒对低、謝iao⒏遺hi定zhiyang本jin行定量jian测,每份yang本连续测定 20 次,穤hi餵i算不同浓度yang本的平均zhiji SD zhi。

批间差:选取 3 个不同批次的shi剂盒穤hi鸲缘汀⒅xiao⒏遺hi定zhiyang本jin行定量测定,每个yang本shiyong同一shi剂盒zhong复

测定 8 次,穤hi餵i算不同浓度yang本的平均zhiji SD zhi。

批内差: CV<10%

批间差: CV<12%

稳定性:

经测定,shi剂盒在有效期内按推jian温度保存,其活性降低聅hi∮冱span> 5%。

为减xiaowai部因素对shi剂盒pohuai前后jian测zhi的影响,实验室的环jing条jian需尽量保chi一致,尤其是实验室内温度、shi度ji温育条jian。其次由同一实验员来jin行操作可减少ren为误差。


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