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大鼠钙调su(CAM)酶联免疫吸附检ce试剂盒

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名称: 大鼠钙调su(CAM)酶联免疫吸附检ce试剂盒
xing号: CAM
展商: ELISA试剂盒
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jiandan介绍

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大鼠钙调su(CAM)酶联免疫吸附检ce试剂盒  的详细介绍

大鼠钙调su(CAM)酶联**吸附检ce试剂盒

使用说明书

预期应用

本试剂簒ing擞盟xing命span>ELISAfa定量ce定大鼠血qing、血浆、组织匀浆、细胞裂解ye、细胞pei养上qingyehe其他生物yetizhong钙调su(CAM)含量。

大鼠钙调su(CAM)酶联**吸附检ce试剂盒ji本原理:

本试剂盒cai用双紉ing腅LISAfa。用kang大鼠钙调su(CAM)包beiyu酶标板上,实验时样品或标准苀en械拇笫蟾频鱯u(CAM)与包bei结合,游离的成fenbei洗qu。襩ai渭尤肷飐uhua的kang大鼠钙调su(CAM)he纀ei齳anghua物酶标记的亲hesu。kang大鼠钙调su(CAM)与结合zai包bei上的大鼠钙调su(CAM)结合、生物su与亲hesu特异xing结合而形成**复合物,游离的成fenbei洗qu。加入显色底物(TMB),TMBzai纀ei齳anghua物酶的催hua下呈现lan色,加终止ye后bian成黄色。用酶标yizai450nm波长处ceOD值,大鼠钙调su(CAM)浓du与OD450值zhi间呈正比,通过绘制标准曲线计suan出样苀en写笫蟾频鱯u(CAM)的浓du。

描述:

ying文名称 Rat CAM (Calmodulin) ELISA Kit
zhong文名称 大鼠钙调su(CAM)酶联**吸附ce定试剂盒
huo号 X-EL-R0140c 种属 Rat/大鼠
规格 96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)
检ce方fa 双紉ing膄a
检ce范围 0.156~10ng/mL 灵敏du 0.094ng/mL

组成:

zhong文名称

ying文名称

规格

保cun

  ELISA酶标板(ke拆卸)

  Micro ELISA  Plate(Dismountable)

  8×12 / 8×6*

4/-20 #

donggan标准品

Reference Standard

  2/1 zhi*

4/-20 #

标准品&样品稀释ye

Reference Standard & Sample Diluent

  1 20mL/12mL*

4

浓缩生物suhua

Concentrated Biotinylated Detection Ab

  1zhi 120μL/70μL*

4/-20 #

生物suhua稀释ye

Biotinytated Detection Ab Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩HRP酶结合物

Concentrated HRP Conjugate

  1zhi 120μL/70μL*

4(避光)

酶结合物稀释ye

HRP Conjugate Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓缩洗diye(25×

ConcentratedWashBuffer (25×)

  1 30mL/16mL*

4

底物溶ye(TMB

Substrate Reagent

  1 10mL/6mL*

4(避光)

反应终止ye

Stop Solution

  1 10mL/6mL*

4

feng板竎ai|/span>

Plate Sealer

  5/3 *

 

说明书

Product  Description

  1 

 

质检报告

Certificate of Analysis

  1 

 

特别说明
*: [96T/48T](打kai包装后请及时检查所有物品是否qi全完整)
#: 
yi周内使用kecunyu4℃,需长时间cun放或多ci使用建议cunyu-20.                                      

大鼠钙调su(CAM)酶联**吸附检ce试剂盒检ceqian准beigong作:

1. 请提qian20fen钟从冰xiangzhong取出试剂盒,平衡至室温。

2. 将浓缩洗diye用双蒸水稀释(1:25)。未用完的放回4℃。从冰xiangzhong取出的浓缩洗diyeke能有结晶,属yu正常现象,ke用40℃水浴微加re使结晶完全溶解后zai配制洗diye(加re温du不yao超过50℃,使用时洗diye应为室温)。当日使用。

3. 标准品: yu10000×g离心1fen钟,加入标准品&样品稀释ye1.0mL至donggan标准苀en校瑇uan紧管盖,静置10fen钟,上下颠倒数ci,待其充fen溶解后,用移ye器将其轻轻混匀(浓du为10ng/mL)。然后根ju需yao进xing倍比稀释(zhu:不yao直接zai反应孔zhong进xing倍比稀释)。建议配制成yi下浓du:按照稀释方fatuli 标准品&样品稀释ye直接作为空白孔0ng/mL。如配制5ng/mL标准品:取0.5mL10ng/mL的上述标准品加入含有0.5mL标准品&样品稀释ye的EP管zhong,混匀即ke,其yu浓du襩ai死嗤啤?nbsp;

4. 生物suhuagong作ye:实验qian计suan当ci实验所需用量(yi100μL/孔计),实ji配制时应多配制100-200μL。使用qian15fen钟,yi生物suhua稀释ye稀释浓缩生物suhua(1:100)成gong作浓du。当日使用。

5. 酶结合物gong作ye:实验qian计suan当ci实验所需用量(yi100μL/孔计),实ji配制时应多配制100-200μL。使用qian15fen钟,yi酶结合物稀释ye稀释浓缩HRP酶结合物(1:100)成gong作浓du。

当日使用。

大鼠钙调su(CAM)酶联**吸附检ce试剂盒标准品稀释方fatuli:(yi500μL/管为li,也ke根ju实ji用量lai稀释,如200μL/管)

1.使用qian将所有的试剂he标本缓慢均衡至室温(18-25oC),试剂不能直接zai37oC溶解。

2.标准品(donggan品):每瓶标准品加入标准品稀释ye1mL,盖好后室温静置大约10fen钟,同时反复颠倒/cuo动yi助溶解,其浓du为10ng/mL。准bei7个稀释标准品的EP管,每个EP管zhong加入500μL的标准品稀释ye,如tu所示襩ai伪侗认∈停曜计废∈蛓e(0pg/mL)直接作为空白孔。为保zheng实验结果觴inging,胟an问笛榍胧褂眯碌谋曜计啡躽e。

      

1. zai各孔zhong加入标准品或样品各100μL, 37℃孵育90fen钟

2. 加入100μL 生物suhuagong作ye,37℃孵育60fen钟

3. 洗di3ci

4. 加入100μL酶结合物gong作ye, 37℃孵育30fen钟

5. 洗di5ci

6. 加入90μL底物溶ye, 37℃孵育15fen钟zuo右

7. 加入50μL终止ye,li即zai450nm波长处ce量OD值

8. 结果计suan

yi、cao作因su对ELISA结果的影响ELISAcao作步zhou复杂,cao作不当将引起较大的wu差。yi下xu述各个步zhouzhong的影响因su。

1.加样

2.温育

3.洗di

4.显色

5.比色

二、粂i纳柚猛ǔG閗uang下,ELISA定xing实验yi“阳xing”he“阴xing”lai报告结果,两者间有yi条fen界线bei称为“阳xing判断值”(cut-off value,CO值),这是定xing**ce定结果报告的依ju。

三、标本复查ELISA手gong检ce过程复杂,影响因su较多,即使室内质控zai控,也ke能因孔间差异而造成结果的差异,因此加大复查lidu是保zheng结果准确xing的kekao方fa,眗e缍訦BsAg、HBeAg、HCV-Ab、HIV-Ab、TP-Ab等项目的keyi、弱阳xing标本及少jian模式的检ce结果进xing复查。

四、结果判断he报告常用下列几种方fa表示结果:

1.定xingce定

2.ban定量ce定 结果yi般yi滴du表示。

3.定量ce定 即用已知量的标准品作yi系列稀释后进xingELISAce定,绘制标准曲线,结果yi优liang量或danwei表示。zaiELISA定量检cezhong每yi块反应板都bi须绘制相应的标准曲线。

大鼠钙调su(CAM)酶联**吸附检ce试剂盒会出现的问题及解决办fa:

1. 加入反应终止ye后,没有吸光值或吸光值偏低。

a.原因:未加入酶标记物。

解决办fa:请按照cao作步zhou进xing。

b.原因:试剂盒内容物未能充fen回。

解决办fa:确定试剂盒内容物回温后zai进xingcao作。

c.原因:室温tai低。

解决办fa:若室温tai低(<19℃),请yucao作步zhou4,适当延长温育时间。

d.原因:未使用试剂盒的qing洗yeqing洗。

解决办fa: 请用试剂盒内所提供的qing洗yeqing洗。

e.原因:试剂盒已过觴ing谙蕖

解决办fa:请更huan成仍zai觴ing谙弈诘氖约梁小

2. 标准曲线线xing不佳,或是平xingxing不好。

a.原因:温育wei置避光不好或受到qi流gan扰。

解决办fa: 请确认温育wei置既不透光也不透风(如抽屉内)。

b.原因:cao作时间拖taijiu。

解决办fa:请zai方fa熟练后zai进xingcao作。

c.原因:微孔间相huwuran。

解决办fa: 加样品时,请小心wu溅出微孔外,yi免造成其它微孔的wuran。

d.原因:标准品或酶标记物所加入的量不yi致。

解决办fa:请使用已校正过的移ye枪,并确保其与吸蚮en溆懈遜u密合xing。

e.原因:添加样品或试剂的cao作方fa不正确。

解决办fa:加样品或试剂时,吸头请wu接chu微孔。

f.原因:洗板过程发生问题(如管路du塞、洗完板后未li刻进xing下yi步zhou)。

解决办fa:请sui时监控洗板机洗板过程,洗完后li即进xing下yi步zhou。

3. 吸光值均偏高(或线xing不够陡)。

a.原因:室温tai高(>25℃)。

解决办fa: 若无fa降低室内温du,请适当缩短步zhou4的温育时间。

b.原因:底物溶ye受到wuran。

解决办fa: 若发现底物溶ye已呈现淡lan色,请不yaozai使用。

c.原因:反应时间超过taijiu。

解决办fa:请控制反应时间。

d.原因:酶标记物wuran了盒内其它试剂。

解决办fa:使用过的吸头应li即丢qi,ke避免试糽iang湎鄅uwuran,凡是试剂(特别是酶标记物与底物溶ye)接chu过的容器应li即qing洗gan净。(先yi漂白水浸泡,zaiyiqing水冲洗gan净,ke确保无残留)

4. 阴xing标准品的吸光值低yu阳xing标准品的吸光值。

a.原因:微孔zhong的试剂未能充fen混合。

解决办fa: 试糽iang油旰螅枨崆胮an四周使其充fen混合均匀。

b.原因:洗板过程发生问题(同2-f.)。

解决办fa:请can考2-f.

c.原因:添加样品或酶标记物的量不yi致。

解决办fa: 请can考2-d.

zhu意事项:

A 仔细阅du说明书。

B 检查试剂盒标qian上的觴ing凇H绻xing冢雡u使用。

C 按说明书确定所有试剂qi全(数量、tiji)。

D 标本制beiyao规范,每份标本tijiyao按2-3个复孔yi上的量制bei(贮cun),尽量fen装做bei份。短期内无fa实验者,zhu意低温保cun。

E 准bei好所有实验e外所需物品,(眗e缫苰e器,试管,qing洗器,酶标yi)。

F 按说明书将所用试剂平衡至室温,根ju检ce标本数量确定所需试剂的量。

G 检查试剂盒内每种试剂的贮cun条件,保zheng所有试剂均按照试剂盒内说明书推jian的条件cun储。

H 检查不稳定或者bian质的试剂溶ye(眗e绯恋砘騜ian色)。觴ing┦约粒re绫曜计废∈蛓e或者检ce稀释ye,ke能zai设计时就含有沉淀物。所有试剂zai滴入酶标板zhiqian,bi需充fen混匀。而由yu沉淀物的特xing,zai加入酶标板zhiqian,bi需不停搅拌。

I 保zheng充fen的孵育时间he温du。

J qiewu使用不同生产批号的试剂取代现有试剂或混合现有试剂。

K zai混合或溶解蛋白溶ye时,避免泡沫产生。

L zai实验kai始zhiqian,安排好实验流程。

M zai实验kai始zhiqian,qing洁gong作台。

N 若有问题,应与我公si或代理商的糺i鮶hi持联系

大鼠钙调su(CAM)酶联**吸附检ce试剂盒结果判断:

1. 每个标准品的OD值减qu空白孔的OD值后作tu,如设置复孔,则应取其平均值计suan。yi标准品的浓du为heng坐标,OD值为zong坐标,绘出标准曲线。亦keyiOD值为heng坐标,标准品的浓du为zong坐标,绘出标准曲线。

2. 推jian使用专业的曲线制作软件,如curve expert 1.3或1.4,zai软件界面既ke根ju样品OD值,由标准曲线查出相应的浓du,乘yi稀释倍数;亦ke将样品的OD值代入标准曲线的拟合方程式,计suan出样品浓du,zai乘yi稀释倍数,糲i返氖礿i浓du。

3. 若样品OD值高yu标准曲线上限,应适当稀释后重ce,计suan浓du时应乘yi稀释倍数。

 特异xing:

本试剂盒用yu检ce大鼠钙调su(CAM),经检ce与其它相似物质无明显交叉反应。

由yu受到糺i跫把緇ai源的限制,不ke能完成对所有相关或相似物质交叉反应检ce,因此本试剂盒有ke能与未经检ce的其它物质有交叉反应。

回收率:

fen别yu定值血qing及血浆样本zhong加入yi定量的大鼠钙调su(CAM)(加标样品),重复ce定并计suan其均值,回收率为ce定謉i肜韑un值的比率

线xing:

zai定值血qing及血浆样本内加入适量的大鼠钙调su(CAM),并倍比稀释成 1:21:41:81:16 的待ce样本,线xing范围糲i∈秃笱緕hong大鼠钙调su(CAM)含量的ce定謉i肜韑un值的比率。


大鼠钙调su(CAM)酶联**吸附检ce试剂盒精密du:

精密du用样品ce定值的bian异系数 CV 表示。CV(%) = SD/mean×100

批内差:取同批ci试剂盒对低、zhong、高值定值样本进xing定量检ce,每份样本连续ce定 20 ci,fen别计suan不同浓du样本的平均值及 SD 值。

批间差:选取 3 个不同批ci的试剂盒fen别对低、zhong、高值定值样本进xing定量ce定,每个样本使用同yi试剂盒重复

ce定 8 ci,fen别计suan不同浓du样本的平均值及 SD 值。

批内差: CV<10%

批间差: CV<12%

稳定xing:

经ce定,试剂簒ing谟xing谀诎赐苆ian温du保cun,其活xing降低率小yu 5%

为减小外部因su对试剂盒破坏qian后检ce值的影响,实验室的环境条件需尽量保持yi致,尤其是实验室内温du、湿du及温育条件。其ci由同yi实验员lai进xingcao作ke减少人为wu差。


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