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大shu钙联蛋白(CNX)酶联mian疫xi附检测试剂盒

如guo您对该感兴趣的话,keyi
名称: 大shu钙联蛋白(CNX)酶联mian疫xi附检测试剂盒
型号: (CNX
展商: ELISA试剂盒
文档: 无相guan文档

简单jie绍

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大shu钙联蛋白(CNX)酶联mian疫xi附检测试剂盒  的xiang细jie绍

大shu钙联蛋白(CNX)酶联**xi附检测试剂盒

使用说ming书

预期应用

本试剂盒运用双夹心ELISA法dingliang测ding大shu血清、血浆、组织yun浆、细胞裂解液、细胞培养上清液和其他生物液体中钙联蛋白(CNX)含liang。

大shu钙联蛋白(CNX)酶联**xi附检测试剂盒基本yuanli:

本试剂盒采用双夹心ELISA法。用kang大shu钙联蛋白(CNX)包被于酶标板上,shi验时样品或标譲i分械拇髎hu钙联蛋白(CNX)与包被jie合,you离的成穤hi幌慈ァR纁ijia入生物素化的kang大shu钙联蛋白(CNX)和辣根过氧化物酶标记的亲和素。kang大shu钙联蛋白(CNX)与jie合在包被上的大shu钙联蛋白(CNX)jie合、生物素与亲和素特异性jie合而形成**复合物,you离的成穤hi幌慈ァia入显色底物(TMB),TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色,jiazhongzhi液hou变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值,大shu钙联蛋白(CNX)nong度与OD450值之jian硈hou齜i,通过绘制标准曲线jisuan出样品中大shu钙联蛋白(CNX)的nong度。

描述:

英文名称 Rat CNX (Calnexin) ELISA Kit
中文名称 大shu钙联蛋白(CNX)酶联**xi附测ding试剂盒
货号 X-EL-R0141c 种属 Rat/大shu
规格 96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)
检测方法 双夹心法
检测范围 0.156~10ng/mL ling敏度 0.094ng/mL

组成:

中文名称

英文名称

规格

保存

  ELISA酶标板(ke拆卸)

  Micro ELISA  Plate(Dismountable)

  8×12 / 8×6*

4/-20 #

冻干标譲i饵/span>

Reference Standard

  2/1 zhi*

4/-20 #

标譲i饵/span>&样品稀释液

Reference Standard & Sample Diluent

  1 20mL/12mL*

4

nong缩生物素化

Concentrated Biotinylated Detection Ab

  1zhi 120μL/70μL*

4/-20 #

生物素化稀释液

Biotinytated Detection Ab Diluent

  1 10mL/6mL*

4

nong缩HRP酶jie合物

Concentrated HRP Conjugate

  1zhi 120μL/70μL*

4(避光)

酶jie合物稀释液

HRP Conjugate Diluent

  1 10mL/6mL*

4

nong缩洗涤液(25×

ConcentratedWashBuffer (25×)

  1 30mL/16mL*

4

底物溶液(TMB

Substrate Reagent

  1 10mL/6mL*

4(避光)

穋onghongzhi液

Stop Solution

  1 10mL/6mL*

4

封板竎ai|/span>

Plate Sealer

  5/3 *

 

说ming书

Product  Description

  1 fen

 

质检报告

Certificate of Analysis

  1 fen

 

特别说ming
*: [96T/48T](打开包zhuanghou请ji时检查所you物品是否齐全完整)
#: 
一周内使用ke存于4℃,xu长时jian存放或多ci使用建议存于-20.                                      

大shu钙联蛋白(CNX)酶联**xi附检测试剂盒检测前准备工作:

1. 请提前20分钟congbingxiang中取出试剂盒,平衡至室温。

2. 将nong缩洗涤液用双蒸shui稀释(1:25)。蝐ong猛甑姆呕?℃。congbingxiang中取出的nong缩洗涤液ke能youjie晶,属于正常现象,ke用40℃shuiyu微jiare使jie晶完全溶解houzai配制洗涤液(jiare温度瞙ui?0℃,使用时洗涤液应为室温)。礲i帐褂谩

3. 标譲i耳 于10000×g离心1分钟,jia入标譲i?amp;样品稀释液1.0mL至冻干标譲i分校艄芨牵仓?0分钟,上下diandao数ci,待其chong分溶解hou,用移液器将其轻轻混yun(nong度为10ng/mL)。ranhou根juxu要进行倍bi稀释(注:瞙ui獄hi接在穋ong字薪斜禸i稀释)。建议配制成yi下nong度:按照稀释方法图例 标譲i?amp;样品稀释液zhi接作为kong白孔0ng/mL。如配制5ng/mL标譲i罚喝?.5mL10ng/mL的上述标譲i穓ia入含you0.5mL标譲i?amp;样品稀释液的EP管中,混yun即ke,其yunong度依此类推。 

4. 生物素化工作液:shi验前jisuan当cishi验所xu用liang(yi100μL/孔ji),shi际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟,yi生物素化稀释液稀释nong缩生物素化(1:100)成工作nong度。礲i帐褂谩

5. 酶jie合物工作液:shi验前jisuan当cishi验所xu用liang(yi100μL/孔ji),shi际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟,yi酶jie合物稀释液稀释nong缩HRP酶jie合物(1:100)成工作nong度。

礲i帐褂谩Ⅻspan>

大shu钙联蛋白(CNX)酶联**xi附检测试剂盒标譲i废∈头椒ㄍ祭海▂i500μL/管为例,也ke根jushi际用liang来稀释,如200μL/管)

1.使用前将所you的试剂和标本huan慢均衡至室温(18-25oC),试剂不能zhi接在37oC溶解。

2.标譲i饵span>(冻干品):每瓶标譲i穓ia入标譲i废∈鸵裹span>1mL,盖好hou室温静置大约10分钟,tong时反复diandao/搓动yi助溶解,其nong度为10ng/mL。准备7个稀释标譲i返命span>EP管,每个EP管中jia入500μL的标譲i废∈鸵海缤妓鵶hi依ci倍bi稀释,标譲i废∈鸵裹span>(0pg/mL)zhi接作为kong白孔。为保证shi验jieguoyou效性,每cishi验请使用新的标譲i啡芤骸

      

1. 在各孔中jia入标譲i坊蜓犯?00μL, 37℃fu育90分钟

2. jia入100μL 生物素化工作液,37℃fu育60分钟

3. 洗涤3ci

4. jia入100μL酶jie合物工作液, 37℃fu育30分钟

5. 洗涤5ci

6. jia入90μL底物溶液, 37℃fu育15分钟zuo右

7. jia入50μLzhongzhi液,立即在450nm波长处测liangOD值

8. jieguojisuan

一、操作yin素对ELISAjieguo的影xiangELISA操作步骤复杂,操作瞙uai苯鸾洗蟮奈蟛睢i下xu述各个步骤中的影xiangyin素。

1.jia样

2.温育

3.洗涤

4.显色

5.bi色

二、huiqu的设置通常情况下,ELISAding性shi验襶u把粜yu焙汀皔in衴u崩幢ǜ鎗ieguo,两者jianyou一条分界线被称为“阳性判断值”(cut-off value,CO值),zhe是ding性**测dingjieguo报告的依ju。

三、标本复查ELISA蕑hiぜ觳夤谈丛樱皒iangyin素较多,即使室内质控在控,也ke能yin孔jian差异而造成jieguo的差异,yin此jia大复查力度是保证jieguo准确性的ke靠方法,眗e缍訦BsAg、HBeAg、HCV-Ab、HIV-Ab、TP-Ab等项目的ke疑、弱阳性标本ji少见mo式的检测jieguo进行复查。

四、jieguo判断和报告常用下lieji种方法biaoshijieguo:

1.ding性测ding

2.半dingliang测ding jieguo一般yi滴度biao蔶in

3.dingliang测ding 糲ong脃i知liang的标譲i纷饕幌祃ie稀释hou进行ELISA测ding,绘制标准曲线,jieguoyiyouliangliang或单weibiao蔶inT贓LISAdingliang检测中每一块穋ongΠ宥急匦牖嬷葡嘤Φ谋曜记摺

大shu钙联蛋白(CNX)酶联**xi附检测试剂盒会出现的问题ji解决办法:

1. jia入穋onghongzhi液hou,没youxi光值或xi光值偏低。

a.yuanyin:weijia入酶标记物。

解决办法:请按照操作步骤进行。

b.yuanyin:试剂盒内容物wei能chong分回。

解决办法:确ding试剂盒内容物回温houzai进行操作。

c.yuanyin:室温太低。

解决办法:若室温太低(<19℃),请于操作步骤4,shi当延长温育时jian。

d.yuanyin:wei使用试剂盒的清洗液清洗。

解决办法: 请用试剂盒内所提供的清洗液清洗。

e.yuanyin:试剂盒yi过you效期限。

解决办法:请更换成reng在you效期限内的试剂盒。

2. 标准曲线线性不佳,或是平行性瞙uan谩

a.yuanyin:温育wei置避光瞙uan没蚴艿狡鞲扇拧

解决办法: 请确认温育wei置既不透光也不透风(如抽ti内)。

b.yuanyin:操作时jian拖太jiu。

解决办法:请在方法熟lianhouzai进行操作。

c.yuanyin:微孔jian相互污萰in

解决办法: jia样品时,请小心wu溅出微孔外,yimian造成其它微孔的污萰in

d.yuanyin:标譲i坊蛎副昙俏锼鵭ia入的liang瞙ui恢隆

解决办法:请使用yi校正过的移液qiang,bing确保其与xi头之jianyou高度密合衴u

e.yuanyin:tianjia样品或试剂的操作方法不正确。

解决办法:jia样品或试剂时,xi头请wu接chu微孔。

f.yuanyin:洗板过程fa生问题(如管路du塞、洗完板houwei立刻进行下一步骤)。

解决办法:请随时监控洗板机洗板过程,洗完hou立即进行下一步骤。

3. xi光值均偏高(或线性不够dou)。

a.yuanyin:室温太高(>25℃)。

解决办法: 若无法降低室内温度,请shi当缩短步骤4的温育时jian。

b.yuanyin:底物溶液受到污萰in

解决办法: 若fa现底物溶液yi呈现淡蓝色,请瞙ui獄ai使用。

c.yuanyin:穋ongκ眏ian超过太jiu。

解决办法:请控制穋ongκ眏ian。

d.yuanyin:酶标记物污染了盒内其它试剂。

解决办法:使用过的xi头应立即丢qi,ke避mian试剂jian相互污染,凡是试剂(特别是酶标记物与底物溶液)接chu过的容器应立即清洗干jing。(先yi漂白shui浸pao,zaiyi清shui冲洗干jing,ke确保无残liu)

4. yin性标譲i返膞i光值低于阳性标譲i返膞i光值。

a.yuanyin:微孔中的试剂wei能chong分混合。

解决办法: 试剂jia完hou,xu轻敲盘四周使其chong分混合均yun。

b.yuanyin:洗板过程fa生问题(tong2-f.)。

解决办法:请参考2-f.

c.yuanyin:tianjia样品或酶标记物的liang瞙ui恢隆

解决办法: 请参考2-d.

注意事项:

A 仔细阅读说ming书。

B 检查试剂盒标签上的you效期。如guo超过you效期,请wu使用。

C 按说ming书确ding所you试剂齐全(数liang、体ji)。

D 标本制备要规范,每fen标本体ji要按2-3个复孔yi上的liang制备(zhu存),jinliang分zhuang做备fen。短期内无法shi验者,注意低温保存。

E 准备好所youshi验额外所xu物品,(眗e缫埔浩鳎怨埽逑雌鳎副暌牵

F 按说ming书将所用试剂平衡至室温,根ju检测标本数liang确ding所xu试剂的liang。

G 检查试剂盒内每种试剂的zhu存条件,保证所you试剂均按照试剂盒内说ming书推荐的条件存储。

H 检查不稳ding或者变謘hi氖约寥芤海ūre绯恋砘虮渖ouxie试剂,眗e绫曜ji废∈鸵夯蛘呒觳庀∈鸵海琸e能在设ji时就含you沉淀物。所you试剂在滴入酶标板之前,必xuchong分混yun。而由于沉淀物的特性,在jia入酶标板之前,必xu不停搅ban。

I 保证chong分的fu育时jian和温度。

J qiewu使用不tong生产批号的试剂取代现you试剂或混合现you试剂。

K 在混合或溶解蛋白溶液时,避mianpao沫产生。

L 在shi验开始之前,an排好shi验流程。

M 在shi验开始之前,清洁工作台。

N 若you问题,应与wo公薺ing虼鷏i商的ji术zhi持联系

大shu钙联蛋白(CNX)酶联**xi附检测试剂盒jieguo判断:

1. 每个标譲i返腛D值减去kong白孔的OD值hou作图,如设置复孔,则应取其平均值jisuan。yi标譲i返膎ong度为横zuo标,OD值为纵zuo标,绘出标准曲线。亦keyiOD值为横zuo标,标譲i返膎ong度为纵zuo标,绘出标准曲线。

2. 推荐使用专业的曲线制作软件,如curve expert 1.3或1.4,在软件界mian既ke根ju样品OD值,由标准曲线查出相应的nong度,乘yi稀释倍数ui鄈e将样品的OD值代入标准曲线的拟合方程式,jisuan出样品nong度,zai乘yi稀释倍数,糲i返膕hi际nong度。

3. 若样品OD值高于标准曲线上限,应shi当稀释houzhong测,jisuannong度时应乘yi稀释倍数。

 特异性:

本试剂盒用于检测大shu钙联蛋白(CNX),经检测与其它相si物质无ming显交叉穋ongΑⅫspan>

由于受到ji术ji样本来yuan的限制,不ke能完成对所you相guan或相si物质交叉穋ong觳猓瑈in此本试剂盒youke能与wei经检测的其它物质you交叉穋ongΑⅫb>

回shou率:

穤hi鹩赿ing值血清ji血浆样本中jia入一dingliang的大shu钙联蛋白(CNX)(jia标样品),zhong复测dingbingjisuan其均值,回shou率为测ding值与lilun值的bi率

线性:

在ding值血清ji血浆样本内jia入shiliang的大shu钙联蛋白(CNX),bing倍bi稀释成 1:21:41:81:16 的待测样本,线性范围糲i∈蚳ou样本中大shu钙联蛋白(CNX)含liang的测ding值与lilun值的bi率。


大shu钙联蛋白(CNX)酶联**xi附检测试剂盒精密度:

精密度用样品测ding值的变异系数 CV biao蔶inⅫ/span>CV(%) = SD/mean×100

批内差:取tong批ci试剂盒对低、中、高值ding值样本进行dingliang检测,每fen样本连续测ding 20 ci,穤hi餵isuan不tongnong度样本的平均值ji SD 值。

批jian差:选取 3 个不tong批ci的试剂盒穤hi鸲缘汀⒅小⒏咧礵ing值样本进行dingliang测ding,每个样本使用tong一试剂盒zhong复

测ding 8 ci,穤hi餵isuan不tongnong度样本的平均值ji SD 值。

批内差: CV<10%

批jian差: CV<12%

稳ding性:

经测ding,试剂盒在you效期内按推荐温度保存,其活性降低率小于 5%

为减小外部yin素对试剂盒pohuai前hou检测值的影xiang,shi验室的环jing条件xujinliang保持一致,尤其是shi验室内温度、shi度ji温育条件。其ci由tong一shi验员来进行操作ke减少萻ong蟛睢