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大鼠钙腔dan白(CALU)酶联免yi吸附检测试剂盒

如果nin对该感兴趣的话,可yi
ming称: 大鼠钙腔dan白(CALU)酶联免yi吸附检测试剂盒
型号: CALU
展商: ELISA试剂盒
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jian单介绍

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大鼠钙腔dan白(CALU)酶联免yi吸附检测试剂盒  的详xi介绍

大鼠钙腔dan白(CALU)酶联**吸附检测试剂盒

使用说明书

yuqi应用

本试剂盒运用双jia心ELISAfa定量测定大鼠血清、血浆、组织匀浆、xi胞lie解ye、xi胞培养上清ye簍ui渌飝e体中钙腔dan白(CALU)含量。

大鼠钙腔dan白(CALU)酶联**吸附检测试剂盒基本原li:

本试剂盒采用双jia心ELISAfa。用抗大鼠钙腔dan白(CALU)包被于酶标板上,实验时样pin或标准pin中的大鼠钙腔dan白(CALU)与包被结合,youli的cheng分被洗去。依次加入生物素hua的抗大鼠钙腔dan白(CALU)和辣根guo氧hua物酶标记的qin和素。抗大鼠钙腔dan白(CALU)与结合在包被上的大鼠钙腔dan白(CALU)结合、生物素与qin和素te异性结合而形cheng**复合物,youli的cheng分被洗去。加入显色底物(TMB),TMB在辣根guo氧hua物酶的催hua下呈现蓝色,加终止yehou变chenghuang色。用酶标仪在450nm波长处测OD值,大鼠钙腔dan白(CALU)浓度与OD450值之间硈hou龋╣uohui制标准曲线计suan出样pin中大鼠钙腔dan白(CALU)的浓度。

描述:


基本原li 描述 试剂盒组cheng 操作步骤 更duozi料
英文ming称 Rat CALU (Calumenin) ELISA Kit
中文ming称 大鼠钙腔dan白(CALU)酶联**吸附测定试剂盒
huo号 X-EL-R0144c 种属 Rat/大鼠
规格 96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)
检测方fa 双jia心fa
检测fan围 0.78100000000000003~50ng/mL ling敏度 0.46899999999999997ng/mL

组cheng:

中文ming称

英文ming称

规格

保存

  ELISA酶标板(可拆卸)

  Micro ELISA  Plate(Dismountable)

  8×12 / 8×6*

4/-20 #

dong干标准pin

Reference Standard

  2/1 *

4/-20 #

标准pin&样pin稀释ye

Reference Standard & Sample Diluent

  1 20mL/12mL*

4

浓suo生物素hua

Concentrated Biotinylated Detection Ab

  1 120μL/70μL*

4/-20 #

生物素hua稀释ye

Biotinytated Detection Ab Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓suoHRP酶结合物

Concentrated HRP Conjugate

  1 120μL/70μL*

4(避光)

酶结合物稀释ye

HRP Conjugate Diluent

  1 10mL/6mL*

4

浓suo洗涤ye(25×

ConcentratedWashBuffer (25×)

  1 30mL/16mL*

4

底物溶ye(TMB

Substrate Reagent

  1 10mL/6mL*

4(避光)

穋ongχ罩箉e

Stop Solution

  1 10mL/6mL*

4

封板覆mo

Plate Sealer

  5/3 *

 

说明书

Product  Description

  1 

 

质检报告

Certificate of Analysis

  1 

 

te别说明
*: [96T/48T](dakai包装hou请及时检查所you物pinshi否齐全wan整)
#: 
一周内使用可存于4℃,需长时间存放或duo次使用建议存于-20.                                      

大鼠钙腔dan白(CALU)酶联**吸附检测试剂盒检测前准备工作:

1. 请提前20分钟cong冰箱中取出试剂簒iao琾ingheng至室温。

2. 将浓suo洗涤ye用双蒸水稀释(1:25)。蝐ong脀an的放回4℃。cong冰箱中取出的浓suo洗涤ye可能you结晶,属于zhengchang现象,可用40℃水浴微加热使结晶wan全溶解hou再配制洗涤ye(加热温度不要超guo50℃,使用时洗涤ye应为室温)。当日使用。

3. 标准pin: 于10000×gli心1分钟,加入标准pin&样pin稀释ye1.0mL至dong干标准pin謝iao瑇uan紧管gai,静置10分钟,上下颠倒数次,待其充分溶解hou,用移ye器将其轻轻hun匀(浓度为50ng/mL)。然hou根ju需要进行倍比稀释(注:不要直接在穋ong字薪斜侗认∈停=ㄒ榕渲芻hengyi下浓度:an照稀释方fa图例 标准pin&样pin稀释ye直接作为空白孔0ng/mL。如配制5ng/mL标准pin:取0.5mL10ng/mL的上述标准pin加入含you0.5mL标准pin&样pin稀释ye的EP管謝iao琱un匀即可,其yu浓度依此类tui。 

4. 生物素hua工作ye:实验前计suan当次实验所需用量(yi100μL/孔计),实际配制时应duo配制100-200μL。使用前15分钟,yi生物素hua稀释ye稀释浓suo生物素hua(1:100)cheng工作浓度。当日使用。

5. 酶结合物工作ye:实验前计suan当次实验所需用量(yi100μL/孔计),实际配制时应duo配制100-200μL。使用前15分钟,yi酶结合物稀释ye稀释浓suoHRP酶结合物(1:100)cheng工作浓度。

当日使用。

大鼠钙腔dan白(CALU)酶联**吸附检测试剂盒标准pin稀释方fa图例:(yi500μL/管为例,也可根ju实际用量来稀释,如200μL/管)

1.使用前将所you的试剂和标本缓慢均heng至室温(18-25oC),试剂不能直接在37oC溶解。

2.标准pin(dong干pin)ao科勘曜紁in加入标准pin稀释ye1mL,gaihaohou室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓dongyi助溶解,其浓度为

50ng/mL
。准备7个稀释标准pin的EP管,每个EP管中加入500μL的标准pin稀释ye,如图所示依次倍比稀释,标准pin稀释ye(0pg/mL)直接作为空白孔。为保证实验结果youxiao性,每次实验请使用新的标准pin溶ye。

      

1. 在各孔中加入标准pin或样pin各100μL, 37℃孵育90分钟

2. 加入100μL 生物素hua工作ye,37℃孵育60分钟

3. 洗涤3次

4. 加入100μL酶结合物工作ye, 37℃孵育30分钟

5. 洗涤5次

6. 加入90μL底物溶ye, 37℃孵育15分钟zuo右

7. 加入50μL终止ye,li即在450nm波长处测量OD值

8. 结果计suan

一、操作yin素对ELISA结果的影xiangELISA操作步骤复杂,操作不当将引起较大的误差。yi下叙述各个步骤中的影xiangyin素。

1.加样

2.温育

3.洗涤

4.显色

5.比色

二、灰区的she置通chang情况下,ELISA定性实验yi“阳性”和“阴性”来报告结果,两者间you一tiao分界线被称为“阳性判duan值”(cut-off value,CO值),这shi定性**测定结果报告的依ju。

san、标本复查ELISA手工检测guocheng复杂,影xiangyin素较duo,即使室内质kong在kong,也可能yin孔间差异而zaocheng结果的差异,yin此加大复查力度shi保证结果准确性的可靠方fa,比如对HBsAg、HBeAg、HCV-Ab、HIV-Ab、TP-Ab等xiang目的可疑、ruo阳性标本及shao见模蔶iang募觳饨峁懈床椤

四、结果判duan和报告chang用下lie几种方fa表示结果:

1.定性测定

2.半定量测定 结果一般yidi度表示。

3.定量测定 糲ong靡阎康谋曜紁in作一系lie稀释hou进行ELISA测定,hui制标准曲线,结果yi优良量或单位表示。在ELISA定量检测中每一块穋ongΠ宥急匦雋ui制相应的标准曲线。

大鼠钙腔dan白(CALU)酶联**吸附检测试剂盒hui出现的问题及解决办fa:

1. 加入穋ongχ罩箉ehou,没you吸光值或吸光值偏低。

a.原yin:未加入酶标记物。

解决办fa:请an照操作步骤进衳iao

b.原yin:试剂盒内容物未能充分回。

解决办fa:萬anㄊ约梁心谌菸锘匚耯ou再进行操作。

c.原yin:室温太低。

解决办fa:若室温太低(<19℃),请于操作步骤4,shi当延长温育时间。

d.原yin:未使用试剂盒的清洗ye清洗。

解决办fa: 请用试剂盒内所提供的清洗ye清洗。

e.原yin:试剂盒已guoyouxiaoqi限。

解决办fa:请更换chengreng在youxiaoqi限内的试剂簒iao

2. 标准曲线线性不jia,或shiping行性不hao。

a.原yin:温育位置避光不hao或受dao气liu干扰。

解决办fa: 请确认温育位置既不透光也不透风(如chou屉内)。

b.原yin:操作时间tuo太久。

解决办fa:请在方fashu练hou再进行操作。

c.原yin:微孔间相互污染。

解决办fa: 加样pin时,请xiao心wu溅出微孔外,yi免zaocheng其它微孔的污染。

d.原yin:标准pin或酶标记物所加入的量不一致。

解决办fa:请使用已xiaozhengguo的移ye枪,并确保其与吸头之间you高度密合性。

e.原yin:添加样pin或试剂的操作方fa不zheng确。

解决办fa:加样pin或试剂时,吸头请wu接触微孔。

f.原yin:洗板guochengfa生问题(如管路du塞、洗wan板hou未li刻进行下一步骤)。

解决办fa:请sui时监kong洗板机洗板guocheng,洗wanhouli即进行下一步骤。

3. 吸光值均偏高(或线性不筯uan?。

a.原yin:室温太高(>25℃)。

解决办fa: 若无fajiang低室内温度,请shi当suo短步骤4的温育时间。

b.原yin:底物溶ye受dao污染。

解决办fa: 若fa现底物溶ye已呈现淡蓝色,请不要再使用。

c.原yin:穋ongκ奔涑琯uo太久。

解决办fa:请kong謕incongκ奔洹

d.原yinao副昙俏镂廴緇iao盒内其它试剂。

解决办fa:使用guo的吸头应li即丢弃,可避免试剂间相互污染,凡shi试剂(te别shi酶标记物与底物溶ye)接触guo的容器应li即清洗干净。(先yi漂白水浸泡,再yi清水冲洗干净,可确保无残liu)

4. 阴性标准pin的吸光值低于阳性标准pin的吸光值。

a.原yin:微孔中的试剂未能充分hun合。

解决办fa: 试剂加wanhou,需轻敲盘四周使其充分hun合均匀。

b.原yin:洗板guochengfa生问题(同2-f.)。

解决办fa:请can考2-f.

c.原yin:添加样pin或酶标记物的量不一致。

解决办fa: 请can考2-d.

注意shixiang:

A 仔xi阅秎iao得魇椤

B 检查试剂盒标签上的youxiaoqi。如果超guoyouxiaoqi,请wu使用。

C an说明书萬anㄋ鵼ou试剂齐全(数量、体积)。

D 标本制备要规fan,每份标本体积要an2-3个复孔yi上的量制备(贮存),尽量分装做备份。短qi内无fa实验者,注意低温保存。

E 准备hao所you实验额外所需物pin,(比如移ye器,试管,清洗器,酶标仪)。

F an说明书将所用试剂pingheng至室温,根ju检测标本数量萬anㄋ枋约恋牧俊

G 检查试剂盒内每种试剂的贮存tiaojian,保证所you试剂均an照试剂盒内说明书tui荐的tiaojian存储。

H 检查不稳定或者变质的试剂溶ye(比如chen淀或变色)。youxie试剂,比如标准pin稀释ye或者检测稀释ye,可能在she计时就含youchen淀物。所you试剂在di入酶标板之前,必需充分hun匀。而you于chen淀物的te性,在加入酶标板之前,必需不停搅拌。

I 保证充分的孵育时间和温度。

J 切wu使用不同生产批号的试剂取代现you试剂或hun合现you试剂。

K 在hun合或溶解dan白溶ye时,避免泡沫产生。

L 在实验kai始之前,安排hao实验liucheng。

M 在实验kai始之前,清洁工作tai。

N 若you问题,应与我公司或代li商的技术支持联系

大鼠钙腔dan白(CALU)酶联**吸附检测试剂盒结果判duan:

1. 每个标准pin的OD值减去空白孔的OD值hou作图,如she置复孔,则应取其ping均值计suan。yi标准pin的浓度为横zuo标,OD謉i輟uo标,hui出标准曲线。亦可yiOD謉i醶uo标,标准pin的浓度为纵zuo标,hui出标准曲线。

2. tui荐使用专业的曲线制作软jian,如curve expert 1.3或1.4,在软jian界面既可根ju样pinOD值,you标准曲线查出相应的浓度,乘yi稀释倍数;亦可将样pin的OD值代入标准曲线的拟合方cheng式,计suan出样pin浓度,再乘yi稀释倍数,即为样pin的实际浓度。

3. 若样pinOD值高于标准曲线上限,应shi当稀释houzhong测,计suan浓度时应乘yi稀释倍数。

 te异性:

本试剂盒用于检测大鼠钙腔dan白(CALU),经检测与其它相似物质无明显jiaocha穋ongΑⅫspan>

you于受dao技术及样本来源的限制,不可能wancheng对所you相关或相似物质jiaocha穋ong觳猓瑈in此本试剂盒you可能与未经检测的其它物质youjiaocha穋ongΑⅫb>

回shoulv:

分别于定值血清及血浆样本中加入襤uan康拇笫蟾魄籨an白(CALU)(加标样pin),zhong复测定并计suan其均值,回shoulv为测定值与lilun值的比lv

线性:

在定值血清及血浆样本内加入shi量的大鼠钙腔dan白(CALU),并倍比稀释cheng 1:21:41:81:16 的待测样本,线性fan围即为稀释hou样本中大鼠钙腔dan白(CALU)含量的测定值与lilun值的比lv。


大鼠钙腔dan白(CALU)酶联**吸附检测试剂盒精密度:

精密度用样pin测定值的变异系数 CV 表示。CV(%) = SD/mean×100

批内差:取同批次试剂盒对低、謝iao⒏咧刀ㄖ笛窘卸考觳狳/span>,每份样本连续测定 20 次,分别计suan不同浓度样本的ping均值及 SD 值。

批间差:选取 3 个不同批次的试剂盒分别对低、謝iao⒏咧刀ㄖ笛窘卸坎舛ǎ扛鲅臼褂猛皇约梁衵hong复

测定 8 次,分别计suan不同浓度样本的ping均值及 SD 值。

批内差: CV<10%

批间差: CV<12%

稳定性:

经测定,试剂盒在youxiaoqi内antui荐温度保存,其活性jiang低lvxiao于 5%

为减xiao外部yin素对试剂盒破坏前hou检测值的影xiang,实验室的huanjingtiaojian需尽量保持一致,尤其shi实验室内温度、shi度及温育tiaojian。其次you同一实验员来进行操作可减shao人为误差。


liu言
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